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為你的植物選擇合適的培養(yǎng)基2018/12/10: 植物組織培養(yǎng)基包括多種成分：無機(jī)鹽、維生素、氨基酸、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、糖類、瓊脂(或結(jié)冷膠)和水。所有這些成分在植物組織培養(yǎng)中至少有1種或多種作用。植物組織培養(yǎng)基中的礦質(zhì)元素進(jìn)入植物細(xì)胞后用于合成有機(jī)分子或作為酶反應(yīng)中的催化劑。可溶性鹽離子在植物電離分子運(yùn)輸中作為平衡離子，滲透壓的調(diào)節(jié)以及維持植物體電化學(xué)勢(shì)的平衡都起著重要的作用。氮、硫和磷是蛋白質(zhì)和核酸的組成成分。鎂離子和許多的微量元素是許多酶和細(xì)胞器的基本組成部分，因此在多種反應(yīng)中起著重要的催化作用。鈣離子和硼酸主要存在植物的細(xì)胞壁中，尤其是鈣離子

抗體敲除驗(yàn)證：捍衛(wèi)實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn) 確?？贵w特異性2018/11/26: 據(jù)估計(jì)，因抗體質(zhì)量不佳，生命科學(xué)領(lǐng)域每年的損失達(dá)到8億美元。這也造成了無數(shù)的實(shí)驗(yàn)失敗，浪費(fèi)了寶貴的資源和科學(xué)家的時(shí)間。盡管科學(xué)界已經(jīng)意識(shí)到這個(gè)問題，但目前仍然缺乏抗體驗(yàn)證的整體框架。為了刺激研究界實(shí)現(xiàn)更高標(biāo)準(zhǔn)的抗體重復(fù)性，抗體驗(yàn)證工作組(IWGAV)于2016年9月份出臺(tái)了一套抗體驗(yàn)證指南并發(fā)表在《NatureMethods》雜志上，題為「AProposalforValidationofAntibodies」，強(qiáng)調(diào)了抗體驗(yàn)證需要針對(duì)應(yīng)用和背景來開展。文章提出了五點(diǎn)，以指導(dǎo)特定應(yīng)用中的抗體驗(yàn)證。遺

古朵技術(shù)：手把手教你選擇適合的慢病毒量2018/11/22: 不論是對(duì)活體還是體外培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，慢病毒表達(dá)載體對(duì)遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率至關(guān)重要。慢病毒早起源于人免疫缺陷病毒(HIV)或貓免疫缺陷病毒(FIV)，能夠感染幾乎所有類型的細(xì)胞，包括難以用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染甚至無法用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。許多客戶對(duì)如何用慢病毒顆粒進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)持有疑問，特別是對(duì)如何選擇適合的慢病毒量感到困惑。這個(gè)問題可根據(jù)確定細(xì)胞的*感染復(fù)數(shù)(MultiplicityofInfection,MOI)來解決。什么是MOI？選購(gòu)慢病毒顆粒之前，首先需了解目的細(xì)胞的*感染復(fù)數(shù)：MOI。MOI的概念很簡(jiǎn)單，

常用試劑配制小常識(shí)——你知道嗎？2018/11/19: 75%酒精殺菌力強(qiáng)，它能使蛋白質(zhì)脫水和變性，在3～5分鐘內(nèi)殺死細(xì)菌。因此，它用于消毒和防腐，適用于皮膚和器械、塑料制品等的消毒。高濃度的酒精(95～100%)能引起菌體表層蛋白質(zhì)凝固，形成保護(hù)層，使酒精分子不易透入，因此殺菌能力反而弱。2、試劑的等級(jí)有哪些？根據(jù)化學(xué)試劑的純度，按雜質(zhì)含量的多少可分為四級(jí)：一級(jí)試劑為純?cè)噭ǔＳ肎·R表示；二級(jí)試劑為分析純?cè)噭ǔＳ肁·R表示；三級(jí)試劑為化學(xué)純?cè)噭ǔＳ肅·R表示；四級(jí)試劑為實(shí)驗(yàn)或工業(yè)試劑，通常用L·R表示。此外，根據(jù)特殊的工作目的，還有一些

在進(jìn)口血清缺乏情況下如何選擇細(xì)胞培養(yǎng)2018/11/16: 胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)常用的添加物，目前享有盛譽(yù)的Life等品牌的胎牛血清價(jià)格飛漲，500ML從原來的3000-4000元漲到現(xiàn)在7000-8000元，給很多科研單位或機(jī)構(gòu)造成了巨大的壓力，不管是科研單位還是經(jīng)銷商都費(fèi)勁心機(jī)儲(chǔ)備高質(zhì)量的進(jìn)口血清。然而前期儲(chǔ)備的較低價(jià)格的進(jìn)口血清總有用完的一天，因此國(guó)內(nèi)相關(guān)單位非常關(guān)注尋求新型的細(xì)胞培養(yǎng)基。但并不是所有的細(xì)胞培養(yǎng)需要高質(zhì)量的胎牛血清，而且市場(chǎng)上有些培養(yǎng)基*可以替代昂貴的Life等品牌血清。筆者對(duì)哺乳細(xì)胞培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基的選擇總結(jié)如下心得，以供大家參考：

古朵生物：常用試劑配制小常識(shí)2018/11/12: 1、哪種濃度的酒精消毒效果？70%酒精殺菌力zui強(qiáng)，它能使蛋白質(zhì)脫水和變性，在3～5分鐘內(nèi)殺死細(xì)菌。因此，它用于消毒和防腐，適用于皮膚和器械、塑料制品等的消毒。高濃度的酒精（95～100%）能引起菌體表層蛋白質(zhì)凝固，形成保護(hù)層，使酒精分子不易透入，因此殺菌能力反而弱。2、試劑的等級(jí)有哪些？根據(jù)化學(xué)試劑的純度，按雜質(zhì)含量的多少可分為四級(jí)：一級(jí)試劑為純?cè)噭?，通常用G·R表示；二級(jí)試劑為分析純?cè)噭?，通常用A·R表示；三級(jí)試劑為化學(xué)純?cè)噭ǔＳ肅·R表示；四級(jí)試劑為實(shí)驗(yàn)或工業(yè)試劑，通常用L·R表示。

胰島素、多肽等蛋白類注射劑的防腐解決方案2018/11/08: 一般單次劑量的注射劑通過滅菌的方法即可達(dá)到無菌，而對(duì)于采用低溫滅菌、濾過除菌或無菌操作法制備的注射劑或多劑量包裝的注射劑，均應(yīng)在處方中添加適宜的抑菌劑，以防止在制造、貯藏和使用過程中可能發(fā)生的微生物污染。抑菌劑具有抑制微生物細(xì)胞生長(zhǎng)的能力，其過劑量也可能對(duì)人體有一定的安全性隱患，所以在注射劑處方中，抑菌劑的用量既要能抑制注射液中微生物的生長(zhǎng)，又要求對(duì)人體無毒、無害。而對(duì)于加有抑菌劑的注射劑，仍要用適宜方法除菌，并在標(biāo)簽或說明書上注明抑菌劑的名稱和用量。不同種類抑菌劑對(duì)溶液pH值有不同要求，如酚類

如何對(duì) cDNA、gDNA進(jìn)行選擇性引物設(shè)計(jì)？2018/11/05: 設(shè)計(jì)策略PS：該方法適用于檢測(cè)或部分DNA片段克隆，不適合全長(zhǎng)基因克隆反轉(zhuǎn)錄PCR的主要問題是基因組DNA（gDNA）污染的存在，這將導(dǎo)致產(chǎn)生假陽(yáng)性信號(hào)，特異性降低或?qū)μ囟≧NA的過高估計(jì)。為了消除RT-PCR中g(shù)DNA的干擾，可將引物設(shè)計(jì)為與兩個(gè)外顯子的接合部退火，該點(diǎn)為cDNA序列專有，因此gDNA將不能被擴(kuò)增。cDNA特異的引物可通過三個(gè)途徑設(shè)計(jì)（如下圖所示）1.引物橫跨外顯子-外顯子接合部。設(shè)計(jì)的引物如果一半與一個(gè)外顯子的3'端結(jié)合，而另一半與相鄰?fù)怙@子的5'端結(jié)合，它將只與mRNA或由

古朵新聞：讓細(xì)胞活躍的訣竅你了解嗎?2018/10/30: 細(xì)胞可是許多生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的主角。如果細(xì)胞心情不好，那么實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也不會(huì)好到哪兒去。如何讓細(xì)胞快樂？下面就有小編帶仔細(xì)了解一下吧！1.確保所有實(shí)驗(yàn)室材料都無菌交叉污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大敵。即使是輕微的污染，也可能毀了幾個(gè)星期的成果。因培養(yǎng)箱內(nèi)溫暖潮濕，真菌極易生長(zhǎng)，因此必須注意定期清潔。此外，在將培養(yǎng)瓶、移液管及其他的相關(guān)物品放入超凈臺(tái)之前，應(yīng)用酒精擦拭干凈，以避免污染。2.小心處理您的培養(yǎng)物細(xì)胞培養(yǎng)的脆弱性怎么強(qiáng)調(diào)也不為過。劇烈搖晃，或連續(xù)的溫度波動(dòng)可能會(huì)對(duì)生長(zhǎng)產(chǎn)生不利的影響。確保培養(yǎng)箱是水平的，溫度

抗體采購(gòu)指南：常用抗體熒光染料的選擇2018/10/25: 隨著免疫熒光技術(shù)的不斷發(fā)展，熒光染料及其標(biāo)記的抗體偶聯(lián)物也被廣泛的應(yīng)用于生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中。目前，市場(chǎng)上抗體及蛋白標(biāo)記的熒光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM,USA);AlexaFluor?系列(Lifetechnology,USA);DyLight系列;Cy系列;IRDye系列等等。使用多的為AlexaFluor?系列和CFTM系列。一、CFTM系列染料的核心對(duì)比AlexaFluor?系列具有以下幾點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：1、新型羅丹明核心羅丹明染料以優(yōu)異的耐光性和良好的熒光量子產(chǎn)量著稱。因此很多AlexaF

手把手教你學(xué)會(huì) CRISPR Cas9 基因敲除技術(shù)2018/10/22: CRISPR/Cas是進(jìn)行基因編輯的強(qiáng)大工具，可以對(duì)基因進(jìn)行定點(diǎn)的編輯。在向?qū)NA(guideRNA，gRNA)和Cas9蛋白的參與下，待編輯的細(xì)胞基因組DNA將被看作病毒或外源DNA，被剪切。一、尋找目的基因的靶標(biāo)靶點(diǎn)挑選要點(diǎn)：基因敲除靶點(diǎn)應(yīng)設(shè)計(jì)在起始密碼子附近(包括起始密碼子)或者起始密碼子下游的外顯子范圍內(nèi)。不同Cas9/gRNA靶點(diǎn)在基因敲除效率上有較大差異，因此同時(shí)設(shè)計(jì)構(gòu)建2～3個(gè)靶點(diǎn)的基因敲除載體再?gòu)闹羞x出敲減效果較佳的靶點(diǎn)。N1-N20NGG靠近PAM的堿基對(duì)靶點(diǎn)的特異性很重要，

古朵生物：細(xì)胞培養(yǎng)過程中有小黑點(diǎn)怎么辦？2018/10/17: 在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，總是能遇到這樣的問題——細(xì)胞中有小黑點(diǎn)，一些難消化長(zhǎng)得慢的細(xì)胞總會(huì)出現(xiàn)黑點(diǎn)，還有一些有漂浮的死細(xì)胞，崩解之后形成黑點(diǎn)和碎片，但還有一些是霉菌或細(xì)菌真菌類的污染也會(huì)形成小黑點(diǎn)，小黑點(diǎn)對(duì)細(xì)胞狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)效果等都有影響，怎么區(qū)別小黑點(diǎn)是細(xì)胞碎片，細(xì)胞核還是細(xì)菌等污染呢？這里我們先介紹一種稱之為黑膠蟲的細(xì)胞小黑點(diǎn)的污染特點(diǎn)及解決方案產(chǎn)品。我們稱之為「黑膠蟲」及其分解復(fù)合物是一種常見的細(xì)胞污染物，其與細(xì)胞共生，隨細(xì)胞傳代而傳代，通?？股貙?duì)其無效。「黑膠蟲」與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不

貼壁、懸浮、原代細(xì)胞感染Protocol及常見問題解答2018/10/15: 慢病毒是當(dāng)前熱門的基因操作，其感染譜廣，可有效地感染腫瘤細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞、心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞，從而為基因功能的研究提供了更強(qiáng)有力的。然而仍有一部分細(xì)胞，尤其是原代細(xì)胞和懸浮細(xì)胞由于細(xì)胞特性，很難獲得的感染效率。為了提高細(xì)胞的感染效率，我們常常選擇多加病毒或使用Polybrene等助感染試劑，然而細(xì)胞狀態(tài)卻變差了，且增加感染效率并沒有達(dá)到理解的效果，這是什么原因呢？一、對(duì)慢病毒感染出現(xiàn)的問題進(jìn)行原因分析1.細(xì)胞狀態(tài)變差——細(xì)胞毒性雜質(zhì)：病毒溶液中殘留的雜質(zhì)蛋白、內(nèi)毒素及宿主

購(gòu)置用于實(shí)驗(yàn)研究檢測(cè)抗體的注意事項(xiàng)2018/10/11: 抗體是完成免疫組織化學(xué)染色的主要試劑，可將其分為特異性一抗(或稱一級(jí)抗體)和第二抗體(或稱二級(jí)抗體，也可稱為二抗或標(biāo)記二抗)，尤其特異性一抗更為重要。目前國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)各種特異性抗體日益增多，銷售公司也很多，大多數(shù)使用者直接選用市售現(xiàn)成商品。抗體質(zhì)量的好壞是完成免疫組化工作的關(guān)鍵，目前可從二條途徑獲得。首先可從市場(chǎng)上獲得商品化抗體，這是主要來源。但有時(shí)為了研究或證實(shí)一種新的抗原成分，而又無相應(yīng)抗體可購(gòu)買時(shí)，往往需要自己制備抗血清。當(dāng)然，也可以從文獻(xiàn)上查找，并向作者索要。原則上應(yīng)選擇在較高稀釋度時(shí)染色

分子標(biāo)記——AFLP原理和操作步驟2018/09/30: 一、原理也是通過限制性內(nèi)切酶片段的不同長(zhǎng)度檢測(cè)DNA多態(tài)性的一種DNA分子標(biāo)記技術(shù)。但AFLP是通過PCR反應(yīng)先把酶切片段擴(kuò)增，然后把擴(kuò)增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進(jìn)行電泳，多態(tài)性即以擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度不同被檢測(cè)出來。實(shí)驗(yàn)中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接，連接后的粘末端順序和接頭順序就作為以后PCR反應(yīng)的引物結(jié)合位點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)中，根據(jù)需要通過選擇在末端上分別填加了1～3個(gè)選擇性核苷的不同引物，可以達(dá)到選擇性擴(kuò)增的目的。這些選擇性核苷酸使得引物能選擇性地識(shí)別具有特異配對(duì)順序的內(nèi)切酶

如何評(píng)估 ES 細(xì)胞合格的胎牛血清？2018/09/26: 胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然，胎牛血清是品質(zhì)gao的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分少。功能牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂

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