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你還搞不清楚病毒載體的用法？2021/11/18: 基因表達(dá)載體是廣大科研人員普遍需要的研究工具，而病毒載體憑借其優(yōu)良效能則越來越成為最shou歡迎、也最為普遍的基因表達(dá)載體。然而病毒載體也分為好幾類，不同實(shí)驗(yàn)類型、不同研究目的、不同“受體”性質(zhì)需要我們準(zhǔn)確評(píng)估與選擇。因此，詳細(xì)了解不同病毒載體的相關(guān)知識(shí)是我們科研人員必須掌握的。本文詳細(xì)介紹了常見病毒載體的原理、特點(diǎn)和適用范圍。一、慢病毒載體慢病毒（Lentivirus）屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，有由于其感染潛伏期較長(zhǎng)，臨床癥狀發(fā)展緩慢，被稱為慢病毒。而慢病毒載體則是在慢病毒的基礎(chǔ)上改變重組其構(gòu)成原

生物標(biāo)本制作常用生理鹽水的配制2021/11/17: 配方一各種動(dòng)物需用的生理鹽水哺乳類需用生理鹽水濃度是0.9%。稱取0.9克氯化鈉，溶解在少量蒸餾水中，稀釋到100毫升。鳥類需用的生理鹽水濃度是0.75%。稱取0.75克氯化鈉，溶解后用蒸餾水稀釋到100毫升。兩棲類需用的生理鹽水濃度是0.65%。稱取0.65克氯化鈉，溶解后用蒸餾水稀釋到100毫升。配方二任氏（Ringer’s）生理鹽水氯化鈉6.5克碳酸氫鈉0.2克lv化鉀0.14克磷酸二氫鈉0.01克氯化鈣0.12克先把氯化鈉、lv化鉀、碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉分別溶解在少量蒸餾水中，混合后用蒸

古朵教您如何驗(yàn)證高壓滅菌器滅菌效果！2021/11/16: 微生物實(shí)驗(yàn)室最少不了的實(shí)驗(yàn)儀器之一就是滅菌器，一般實(shí)驗(yàn)室常用的是高壓蒸汽滅菌器。GB4789.1-2016中要求：實(shí)驗(yàn)設(shè)備應(yīng)定期進(jìn)行檢查和/或檢定（加貼標(biāo)志）、維護(hù)和保養(yǎng)，以確保工作性能和操作安全。但你的滅菌器有沒有類似的檢查呢？如果要做類似的驗(yàn)證，又需要怎么做呢？今天就給大家匯總一下高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗(yàn)證的相關(guān)內(nèi)容。高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗(yàn)證一般有化學(xué)指示劑法、留點(diǎn)溫度計(jì)法、自制測(cè)溫管法和生物指示劑法，每種方法的原理都是相似的，主要是通過驗(yàn)證滅菌時(shí)滅菌器里的溫度能否達(dá)到要求。我們可以根據(jù)自

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的特點(diǎn)及制作步驟2021/11/15: 由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細(xì)菌，因此，要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方如下：牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g瓊脂15—20克水1000mlpH7．4—7．6一、器材牛肉膏，蛋白胨，NaCl，瓊脂；1mol/LNaOH，1mol/LHCl；試管，三角燒瓶，燒杯，量筒，玻棒，培養(yǎng)基分裝器，扭力天平，牛角匙，高壓蒸汽滅菌鍋，pH試紙（pH5．5—9．0），棉花，牛皮紙，記號(hào)筆，麻繩，紗布等。二、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制作步驟1．稱量按培養(yǎng)基配方比例依

質(zhì)粒的作用機(jī)制、條件及特點(diǎn)了解下2021/11/12: 質(zhì)粒(plasmid)廣泛存在于生物界，從細(xì)菌、放線菌、絲狀真菌、大型真菌、酵母到植物，甚至人類機(jī)體中都含有。從分子組成看，有DNA質(zhì)粒，也有RNA質(zhì)粒;從分子構(gòu)型看，有線型質(zhì)粒、也有環(huán)狀質(zhì)粒:其表型也多種多樣。細(xì)菌質(zhì)粒是基因工程中最chang用的載體。通常，科學(xué)家利用質(zhì)粒在靶細(xì)胞中進(jìn)行基因的過表達(dá)。質(zhì)粒的靈活性、兼容性、安全性、經(jīng)濟(jì)性等特性促進(jìn)了分子生物學(xué)家將其應(yīng)用于各種用途。一些常用的質(zhì)粒類型包括：克隆質(zhì)粒、表達(dá)質(zhì)粒、基因下調(diào)質(zhì)粒、基因敲除質(zhì)粒、報(bào)告質(zhì)粒、病毒質(zhì)粒等?？寺≠|(zhì)粒：旨在擴(kuò)增目的D

慢病毒包裝簡(jiǎn)要步驟及注意事項(xiàng)，科研人注意！2021/11/11: 慢病毒包裝簡(jiǎn)要步驟以六孔板中的1孔為例，每個(gè)樣品需要1×106個(gè)293T細(xì)胞。1.取1.5ml滅菌EP管，加入1.5μg包裝混合質(zhì)粒和0.5μg表達(dá)質(zhì)粒以及250μl的無血清培養(yǎng)基。輕柔混勻，室溫孵育5min。2.取1.5ml滅菌EP管，取9μl脂質(zhì)體2000l溶于250μl無血清培養(yǎng)基中。輕柔混勻，室溫孵育5min。3.將DNA溶液和脂質(zhì)體溶液輕柔混勻。室溫孵育20min4.用胰酶消化并記數(shù)293T細(xì)胞。用含血清的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。5.在六孔板中每孔，加入1ml含血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，再加入DNA-

關(guān)于膠回收的一些心得體會(huì)2021/11/10: 1、提高膠回收量的技巧1)增加電泳時(shí)的上樣量。2)電泳緩沖液用新鮮配制的。3)切膠時(shí)盡量只切有條帶的膠，減小切膠體積：含目的片斷很少的膠就不要要了，不然影響回收率。4)把切的兩塊或多塊膠融化后，無論多大的體積都用一個(gè)管子，轉(zhuǎn)移到同一個(gè)柱子上。5)溶膠時(shí)所加的溶液可多一點(diǎn)，這樣更有利于DNA與膜的結(jié)合，不過一般不要多余750ul。6)膠回收的關(guān)鍵是通過柱子的溶液的鹽濃度、酸堿性(電荷)和疏水性使DNA與柱子結(jié)合。因此，若電泳緩沖液的PH偏高，可在溶膠液中加入10ul(PH5.0，3mol/L的Na

為啥你的細(xì)胞長(zhǎng)得慢？細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢原因2021/11/08: 細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的常見原因:(1)培養(yǎng)基可能缺乏細(xì)胞生長(zhǎng)所需的某種因子。通常情況下，當(dāng)小伙伴購(gòu)買細(xì)胞，并沒有按照ATCC或國(guó)內(nèi)細(xì)胞庫推薦的方法制備培養(yǎng)基，使用實(shí)驗(yàn)室兄弟姐妹使用的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。解決方法一般是按照推薦的方法制備培養(yǎng)基，或直接購(gòu)買培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。(B)細(xì)菌、支原體、真菌等污染:雖然培養(yǎng)基中通常添加雙抗體(青霉素和鏈霉素)，但如果無菌操作觀念不強(qiáng)，仍有可能造成污染。處理方法:如果有冷凍細(xì)胞，可以丟棄污染細(xì)胞。當(dāng)然，丟棄并不是隨意的，扔進(jìn)垃圾桶。應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)定進(jìn)行。然后復(fù)蘇培

PBS和D-PBS緩沖溶液怎么配制？2021/11/05: 磷酸鹽緩沖液(簡(jiǎn)稱PBS)的是生物化學(xué)中常用的一種阻礙溶液pH變化的緩沖溶液，這種由鹽溶液中含有氯化鈉，磷酸鹽，磷酸鹽，lv化鉀和磷酸鉀組成。組份濃度：137mM氯化鈉，2.7mMlv化鉀，10mM磷酸二氫鈉，2mM磷酸2氫鉀。本文總結(jié)了PBS和D-PBS溶液的配制方法。1.常規(guī)PBS磷酸鹽緩沖液組成成份：磷酸2氫鉀34g1mol/L氫氧化鈉溶液175ml蒸餾水825mlPH7.2配制：先將磷酸鹽溶解于500mL蒸餾水中，用1mol/L氫氧化鈉溶液校正pH后，再用蒸餾水稀釋至1000mL。稀釋液

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)原理與操作2021/11/04: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RealtimePCR）是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)累積實(shí)現(xiàn)了實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，并對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析的方法。其涉及領(lǐng)域包括：臨床疾病診斷、動(dòng)物檢驗(yàn)檢疫、食品安全和科學(xué)研究等。在xin型guan狀病毒、肝炎、艾zi病、流感、登革熱、感染性腹瀉等的檢測(cè)、診斷和治療上發(fā)揮著重要作用。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法可分別為SYBRGreenl熒光染料法和Taqman探針法。日常進(jìn)行核酸檢測(cè)就是運(yùn)用Taqman探針法，新guan病毒核酸檢測(cè)也是利用此項(xiàng)技術(shù)。該法高度特

培養(yǎng)基制備的操作要點(diǎn)合集2021/11/03: 制作培養(yǎng)基真真是微生物實(shí)驗(yàn)室的家常便飯，培養(yǎng)基配成后一般需測(cè)試并調(diào)節(jié)pH，還須進(jìn)行滅菌，培養(yǎng)基由于富含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，易被污染或變質(zhì)，配制過程中有多個(gè)注意事項(xiàng)和操作要點(diǎn)需要我們掌握，接下來就一起看看吧。首先，什么是培養(yǎng)基?培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動(dòng)物(或組織)生長(zhǎng)繁殖的，由不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。其次，培養(yǎng)基的種類。培養(yǎng)基種類很

海藻及海洋細(xì)菌的DNA制備方法2021/11/02: 眾suo周知，海藻由于富含多糖，DNA提取是一大難題，以下是在試驗(yàn)過程中收集的海藻DNA制備方法，經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證可行，現(xiàn)在貼出來，以觴眾戰(zhàn)友。一、可大量培養(yǎng)的海洋細(xì)菌1、取1ml目的菌菌液至1.5ml的EP管中，5000r/m離心5分鐘棄上清，菌體加入500μl水洗滌一次，5000r/m離心5分鐘，棄上清，向菌體中加入200μl懸浮緩沖液。2、在200μl懸浮緩沖液中加人55℃Tirs飽和酚200μl和10%的SDS45μl混勻，在微型蝸旋混和儀上混勻，55℃溫浴15分鐘，并且不斷振蕩混勻。3、12

PCR產(chǎn)物的檢測(cè)方法你知道幾種？2021/11/01: PCR產(chǎn)物的檢測(cè)方法：瓊脂糖凝膠電泳這是實(shí)驗(yàn)室最chang用的方法，簡(jiǎn)便易行，只需少量DNA即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其原理是不同大小的DNA分子通過瓊脂糖凝膠時(shí)，由于泳動(dòng)速度不同而被分離，經(jīng)溴化乙錠（EB）染色，在紫外光照射下DNA分子發(fā)出熒光而判定其分子的大小。用于電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物的瓊脂糖濃度常為1%—2%，應(yīng)該使用純度高的電泳純級(jí)瓊脂糖，這種瓊脂糖已除去了熒光抑制劑及核酸酶等雜質(zhì)。（1）制膠瓊脂糖凝膠厚度約為3~5mm。過薄則加樣孔樣品會(huì)溢出來，過厚觀察時(shí)熒光穿透不強(qiáng)以至有些小片段DNA帶型不易分辨

實(shí)驗(yàn)室試劑、器皿使用管理制度2021/10/28: 試劑、器皿使用管理制度1.試劑、器皿應(yīng)有專人保管，分類存放，并定期檢查使用及保管情況。領(lǐng)用時(shí)需填寫記錄，過期或失效試劑要經(jīng)審核后作報(bào)廢處理。2.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)保存的少量易燃易爆試劑要放在遠(yuǎn)離加熱操作臺(tái)的陰涼通風(fēng)處保管。3.劇毒、危害及易制du品試劑應(yīng)存放在倉庫的專柜內(nèi)，由兩人以上人員保管，領(lǐng)用時(shí)要填寫相關(guān)記錄。4.稱取化學(xué)試劑的器皿應(yīng)洗滌干凈，分開使用。固體試劑的取用遵循“只出不進(jìn)，量用為出”的原則；液體試劑的取用遵循“只準(zhǔn)傾出，不準(zhǔn)吸出”的原則。5.揮發(fā)性強(qiáng)的試劑必須在通風(fēng)櫥內(nèi)取用。使用揮發(fā)性強(qiáng)的有

只會(huì)檢測(cè)那怎么行？看看采樣、留樣相關(guān)知識(shí)吧！2021/10/27: 對(duì)于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)來說，采樣、留樣（包括成品留樣和物料留樣），樣品采集應(yīng)該按照何種原則來，留樣應(yīng)該如何管理？這些問題你是否考慮過？今天一起來看看檢測(cè)室采樣、留樣及樣品管理制度吧。1、目的為了保證分析數(shù)據(jù)、樣品的準(zhǔn)確性和具有可追溯性，便于抽查、復(fù)查、滿足監(jiān)督管理要求，分清質(zhì)量責(zé)任，特制訂本管理制度。2、依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)本管理制度在安全采樣方面依據(jù)：GB3727《工業(yè)化學(xué)產(chǎn)品采樣安全通則》；GB4756《石油液體手工取樣法》；GB6678《化工產(chǎn)品采樣總則》；GB6679《固體化工產(chǎn)品采樣通則》；GB6680《

各種類的動(dòng)物血清與它們的用途2021/10/26: 1、透析血清分子量小于10,000的分子如氨基酸、葡萄糖、鹽離子和未結(jié)合的蛋白均被移除。透析血清主要用在進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)化和標(biāo)定特定成分進(jìn)行研究的實(shí)驗(yàn)中。2、碳吸附血清使用活性和右旋糖苷去除血清中的親脂類(lipophilic)物質(zhì)，如某些激素、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等，去除作用對(duì)分子量大小并無區(qū)分。碳吸附胎牛血清常用于體外培養(yǎng)研究驗(yàn)證激素的作用效果。3、去外泌體血清適用于收集細(xì)胞分泌的外泌體時(shí)使用。4、低IgG血清用于研究抗體、病毒和病毒反應(yīng)、細(xì)胞表面抗原表位。5、四環(huán)素血清應(yīng)用于使用敏感四環(huán)素誘導(dǎo)

實(shí)驗(yàn)室存在的安全問題及解決方案2021/10/25: 近年來實(shí)驗(yàn)室事故頻發(fā)，往事歷歷在目。吸取教訓(xùn)、總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，是預(yù)防事故發(fā)生的最好辦法。目前，大部分實(shí)驗(yàn)室都存在著哪些安全問題?應(yīng)對(duì)這些問題的解決方案又有哪些?實(shí)驗(yàn)室安全面臨的問題技術(shù)方面存在的問題1.規(guī)劃設(shè)計(jì)考慮不周，造成安全隱患由于規(guī)劃設(shè)計(jì)人員對(duì)各類實(shí)驗(yàn)室的功能要求缺乏一定程度的了解，尤其是對(duì)一些特殊實(shí)驗(yàn)室的特殊要求知之甚少，因此在實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的規(guī)劃設(shè)計(jì)中對(duì)設(shè)施和裝備的安全要求考慮不周，工程設(shè)計(jì)上存在漏洞，包括人與機(jī)械、作業(yè)環(huán)境之間匹配不當(dāng)?shù)?，造成了安全隱患。2.安裝防護(hù)門窗，堵塞安全通道近年來，實(shí)

菌落總數(shù)檢測(cè)中常見的一些問題2021/10/22: 菌落總數(shù)作為判定食品被細(xì)菌污染程度的標(biāo)志，也可以應(yīng)用這一方法觀察食品中細(xì)菌的性質(zhì)以及細(xì)菌在食品中繁殖的動(dòng)態(tài)，以便對(duì)被檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)提供科學(xué)依據(jù)。今天，小編就和大家說說菌落總數(shù)檢測(cè)中常見的一些問題。菌落總數(shù)知識(shí)1、食品中測(cè)定的菌落總數(shù)就是食品的細(xì)菌總數(shù)嗎？不是的，菌落總數(shù)是指在一定條件下（如需氧情況、營(yíng)養(yǎng)條件、PH等）每克（每毫升）檢樣所生長(zhǎng)出來的細(xì)菌菌落總數(shù)。按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定，即在需氧情況下，36±1℃培養(yǎng)48±2h，能在平板計(jì)數(shù)瓊脂平板上生長(zhǎng)的細(xì)菌菌落總數(shù)，因此，厭氧或微需氧菌等，由

植物組織培養(yǎng)苗的污染與檢測(cè)2021/10/21: 一、在組織培養(yǎng)中污染來源1.植物本身具有：（1）植物病原菌有些作物的病害已被透徹研究，因此在大量繁殖時(shí)，可立即檢查出來，但有些則否，造成若有污染時(shí)，不知來源為何。（2）和植物有關(guān)的菌類有修植物本身便會(huì)和一些菌種共生，或是寄生于植物內(nèi)部。2.植物所帶入的污染：內(nèi)在污染源許多植物表面或大氣中生存的微生物，可經(jīng)由植物自然的開口或傷口進(jìn)如植物內(nèi)部，而有一些兼性腐生菌或絕對(duì)寄生菌，可藉由載體或是擁有一些侵入的機(jī)制侵入植物內(nèi)部，依其存在的地方分為1.細(xì)胞內(nèi)－inter2.細(xì)胞間隙－interacellula

實(shí)驗(yàn)室試劑的有效期怎么定？2021/10/19: 試劑的有效日期是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的重要因素。在實(shí)際使用過程中，人們總是習(xí)慣于用生產(chǎn)日期來判斷化學(xué)試劑的有效性，其實(shí)這是不對(duì)的?；瘜W(xué)試劑不像食品和藥品有嚴(yán)格的保質(zhì)期，化學(xué)試劑一般沒有保質(zhì)期的具體要求和界限，這與化學(xué)試劑的保質(zhì)期受多方面因素影響有關(guān)。要根據(jù)化學(xué)性質(zhì)、保存條件等，再結(jié)合工作的實(shí)際情況判斷試劑是否出現(xiàn)變質(zhì)、能否繼續(xù)使用?；瘜W(xué)試劑一般沒有注明保質(zhì)期，確定試劑是否變質(zhì)主要是憑經(jīng)驗(yàn)和做新舊試劑對(duì)比試驗(yàn)?；瘜W(xué)試劑的有效期隨著化學(xué)品的化學(xué)性質(zhì)的改變，有著很大的區(qū)別。一般情況下，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的物質(zhì)

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