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如何評估 ES 細胞合格的胎牛血清?

2018
09-25

16:56:20

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來源:上海古朵生物科技有限公司
  胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生 24 小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生 10-30 天的小牛。
 
  顯然,胎牛血清是品質(zhì)gao的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分少。
 
功能
 
  牛血清是細胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動物細胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。
 
  提供對維持細胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
 
  提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
 
  有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
 
  是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
 
  起酸堿度緩沖液作用。
 
  提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。
 
  如何評估 ES 細胞合格的胎牛血清?
 
  使用 D3 ES 細胞。這是一個對于胎牛血清中生長促進、生長抑制和分化因子非常敏感的細胞系。
 
  相關(guān)生*率分析:
 
  當 ES 細胞以非常低的密度傳入包含 10%胎牛血清的生長培養(yǎng)基中,檢測開始和支持 ES 細胞克隆的能力。
 
  細胞毒分析:
 
  當以非常低的密度傳入包含 30%胎牛血清的生長培養(yǎng)基中,檢測 ES 細胞和 feeder 細胞的生長能力。
 
  相關(guān)形態(tài)學(xué)和分化分析:
 
  檢測胎牛血清支持未分化 ES 細胞克隆的能力。通過堿性磷 suan 酶活性評估分化程度。未分化的 ES 細胞小顏色深紅 fen 紅,分化的細胞較大,豐滿,顏色較淺。所有的分析在沒有 ESGRO 的情況下進行的,培養(yǎng)基中出現(xiàn) ESGRO 會掩蓋由胎牛血清所導(dǎo)致的問題。(ESGRO 或 LIF 經(jīng)常用來保持 ES 細胞處于未分化狀態(tài)。)經(jīng)過培養(yǎng)發(fā)現(xiàn),大約 8 批中有 1 批可以用來培養(yǎng) ES 細胞。
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