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古朵生物：細胞凍存步驟的專業(yè)實驗流程2019/11/28

我們知道，在細胞培養(yǎng)檢測實驗在實驗儀器、培養(yǎng)基等等工作上都要耗費不少的人力和體力。好在很久以前就有高人發(fā)明了細胞保存這個實驗步驟，將暫時多出來的細胞冰凍保存，以zui大程度保存細胞活力。一、細胞冷凍保存1.材料：生長良好之培養(yǎng)細胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO(SigmaD-2650)、無菌塑料冷凍保存管(Nalgene5000-0020)、0.4%(w/v)trypanblue(GibcoBRL15250-061)、血球計數(shù)盤與蓋玻片、等速降溫機(KRYO10SeriesII)2.冷凍保存方法：(1)

DAPI染DNA的原理及使用方法 古朵新聞√2019/11/25

DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，分子式為C16H15N5·2C3H6O3，分子量457.48。DAPI是一種能夠與DNA強力結合的熒光染料。它結合到雙鏈DNA小溝的AT堿基對處，一個DAPI分子可以占據(jù)三個堿基對的位置。結合到雙鏈DNA上DAPI分子的熒光強度提高大約20倍，常用與熒光顯微鏡觀測，根據(jù)熒光的強度可以確定DNA的量。另外，因為DAPI可以透過完整的細胞膜，它可以用于活細胞和固定細胞的染色。在熒光顯微鏡觀察下，D

同樣是慢病毒感染細胞，為什么你的效率那么差！2019/11/22

慢病毒不但可感染分裂或非分裂細胞，還可將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而實現(xiàn)持久表達，又很少引發(fā)機體免疫反應。被譽為「細胞實驗shou選、體內實驗*」工具病毒。并且作為基因載體在治療各類遺傳性和后天性的人類疾病中倍受歡迎：從基礎研究發(fā)展到臨床階段，高濃度、高感染效率的慢病毒都是感染細胞表達（或沉默）目的基因的理想分子工具。那么慢病毒在感染細胞中有什么優(yōu)良表現(xiàn)呢？慢病毒感染細胞的步驟一般是這個樣子的，以「24孔培養(yǎng)板、貼壁細胞」為例：Day0:接種細胞每孔按5×104個待感染細胞鋪板，用含有

凝膠遷移實驗（EMSA）實驗方法2019/11/18

凝膠遷移實驗有稱凝膠阻滯實驗或電泳遷移率實驗（EMSA，electrophoreticmobilityshiftassay），是一種用于蛋白與核算相互作用的技術。初是用于轉錄因子與啟動子相互作用的驗證性實驗，也可應用與蛋白-DNA、蛋白-RNA互作研究。一、實驗原理EMSA主要基于蛋白-探針復合物在在凝膠電泳過程中遷移較慢的原理。根據(jù)實驗設計特異性和非特異性探針，當核酸探針與樣本蛋白混合孵育時，樣本中可以與核酸探針結合的蛋白質與探針形成蛋白-探針復合物；這種復合物由于分子量大，在進行聚丙烯酰胺凝

古朵新聞：為什么 PCR 跑不出滿意的結果？2019/11/14

PCR是一個坑，坑里埋了好多研究僧……PCR是眾位「研究僧」日常實驗中常用的技術，可謂是「研究盛宴」中的一道「小菜」?？梢灿胁簧偻从?，這道菜不hao吃，一不小心就「小河里翻船」。那么，我們該如何把這道菜「吃好」、跳出這個「坑」呢？諸位看官莫急，待我送君「三大fa寶」。一、確保RNA樣本合格常見的RNA提取方法有TRIzol法、吸附法，這兩個方法各有所長，但都不能保證提取的RNA樣本一定合格。因而，提取完成后應測定RNA的濃度及吸光度。通常，在260，280，230nm處分別測定其吸光度（A2

別再讓你培養(yǎng)的細胞睡在硬板床上了！2019/11/12

*，體內細胞所處周邊環(huán)境的軟硬度(softness，stiffness)可謂千差萬別，憑直覺想想脂肪細胞和骨細胞吧?？墒俏覀凅w外培養(yǎng)細胞時卻選擇使用了幾乎相同的材質，硬邦邦的培養(yǎng)皿、板或培養(yǎng)瓶。你可能說：“這沒啥呀，大家不都是這樣做的嗎？我的細胞也長的挺好呀！”別再固執(zhí)的認為細胞生長在“硬板床”上對其沒有什么影響了，大量的研究表明細胞所處環(huán)境的硬度對其生物學行為影響可謂相當?shù)拇?。其實，要根?jù)所培養(yǎng)細胞所處的體內環(huán)境環(huán)境選擇相應軟硬度的基質，盡大可能保持細胞固有的特性并不難：MatrigenLif

選購胎牛血清（FBS）的四個要點 古朵新聞√2019/11/04

胎牛血清（FBS）是常用的血清添加劑，因為它富含生長因子、蛋白和大分子。盡管無血清和非動物來源的培養(yǎng)基也逐漸走紅，但許多細胞系未必適用，并且存在費用較高和生長較慢等缺點。那么，研究人員在評估FBS的質量時，需要考慮哪些標準呢？對于細胞培養(yǎng)而言，血清的重要性不言而喻。它含有蛋白、生長因子、氨基酸、脂類、碳水化合物、維生素及其他組分，可以促進貼壁或懸浮細胞的生長和維持。胎牛血清（FBS）是常用的血清添加劑，因為它富含生長因子、蛋白和大分子。盡管無血清和非動物來源的培養(yǎng)基也逐漸走紅，但許多細胞系未必適

生長因子的種類及其功效 古朵新聞√2019/11/01

說到生長因子，愛美人士一定會有所了解，在美容護膚產品中時常能看見它們的身影。生長因子是個體自身細胞產生的能夠刺激細胞生長活性的細胞因子。它們能夠通過與特異的、高親和的細胞膜受體結合，從而調節(jié)細胞生長以及其他細胞功能。有些因子被發(fā)現(xiàn)能夠主動與傷口附近細胞膜上的特異性受體相結合，從而促進皮膚和粘膜創(chuàng)面愈合，能夠快速修復創(chuàng)傷。有些研究表明，如表皮生長因子（EGF），能促進表皮細胞增殖分化，使衰老死亡的細胞得以及時補充，使損傷的表皮得以修復。所以，這類生長因子常會被添加進美容護膚品中，對改善肌膚粗糙、消

熒光素酶和腔腸素Coelenterazine的選擇及使用2019/10/29

熒光素酶自然界中的熒光素酶：是自然界中能夠產生熒光的酶的系統(tǒng)，如發(fā)光真菌，發(fā)光海星，發(fā)光魚，發(fā)光節(jié)蟲，發(fā)光甲蟲等。螢火蟲熒光素酶：目前常用的螢火蟲熒光素酶來源于北美螢火蟲（Photinuspyralis）,是一個61KDa的單體酶，無需表達后修飾，直接具有*酶活性，反應需要底物熒光素以及ATP、氧氣、鎂離子等。海腎熒光素酶：來源于海腎（Renillareniformis），是一個36KDa的單體酶，表達后無需修飾，即可具有*酶活，反應只需要腔腸素和O2參與。Gussia熒光素酶：來源于海洋橈腳類

免疫組化的二抗有區(qū)別嗎！怎么選擇呢？2019/10/25

免疫組化大家基本上都做過，你知道有二抗，也應該知道免疫組化的原理就是一抗結合到目標蛋白，再有二抗來進行信號放大，大概是這樣：但是你知道二抗的信號放大實際上有多種方法……這就需要你進行二抗標記方法的選擇，簡單的二抗標記方法是直接法：就是直接在二抗上標記酶，比如HRP，來進行顯色，這樣的二抗實際上很便宜，但是缺點就是靈敏度低，好多低豐度的蛋白，結合不上，免疫組化染出來的效果就不太好。第二種方法，叫做PAP，比如二抗標記了HRP，他們就在孵育二抗后，再孵育一種能結合HRP的一抗，就像這樣：這種方法靈敏

研究免疫細胞時 環(huán)境至關重要 古朵新聞√2019/10/21

密歇根州格蘭德拉皮茲(2019年10月10日)-多年來，科學家們一直使用培養(yǎng)皿中生長的細胞來研究促進免疫系統(tǒng)運轉的代謝過程。但是《免疫》雜志上的一份新報告建議，將目光放到盤子外面，看看活生物體，對免疫細胞處理和利用能量的方式有截然不同的看法。過去的研究表明，稱為T細胞的專門免疫細胞將稱為葡萄糖的糖轉化為能量，以增強細胞功能。但是，這種信念主要建立在培養(yǎng)皿中生長的細胞數(shù)據(jù)上，而這些數(shù)據(jù)與正常環(huán)境相去甚遠?！斑@類似于在動物園和野外觀察動物的行為。我們的免疫細胞不是在真空中運作的，它們會與許多其他細胞

干細胞基因療法的主要障礙得以解決 古朵生物√2019/10/14

轉基因造血干細胞（HSC）移植是遺傳病、HIV和癌癥的一種有前景的治療策略。然而，臨床HSC基因治療的一個障礙是，基因通過慢病毒載體（LV）傳遞到HSCs的效率有限。近，科學家們解決了這個主要的障礙：如何繞過造血干細胞的自然防御系統(tǒng)，有效地將抗病基因插入細胞的基因組中。由美國斯克里普斯研究所（TSRI）副教授BruceTorbett帶領的一項研究報道稱，藥物雷帕霉素（rapamycin）——常用于減緩腫瘤生長和防止qi官yi植排斥反應，可使治療劑量的基因能夠傳遞到造血干細胞中，同時保護干細胞的功

細胞&基因治療？其實是載體治療！古朵新聞√2019/10/08

無論是什么藥物在人體中起作用都分兩步：delivery和function。我們所說的細胞＆基因治療更加需要的delivery和強大的function。如何將目的基因或者細胞安全有效地傳送到人體內成為細胞和基因治療個要突破的重要瓶頸。今天我們就來簡單總結一下各個重要載體的異同。病毒和非病毒載體目前的基因&細胞治療主要采用病毒和非病毒兩種載體形式。根據(jù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計，使用非病毒載體進行臨床實驗的項目大約占目前基因&細胞治療總數(shù)量的36.6%；其主要載體形式有質粒和脂質體等。而大部分的基因&細胞治療項目都是

使用慢病毒的常見問題 古朵新聞√2019/09/29

1.怎樣購買份量合適數(shù)量的慢病毒顆粒？一套完整實驗所需的慢病毒顆粒包括：1.含有目的基因的慢病毒顆粒，2.陰性對照慢病毒顆粒，3.用于預實驗的陽性對照慢病毒顆粒。購買時可以根據(jù)目的細胞特性、檢測方法、培養(yǎng)器皿估算慢病毒顆粒的*用量，避免剩余的大量慢病毒顆粒超出*保存期；此外，GeneCopoeiaTM同時提供高滴度低價格的陽性對照慢病毒顆粒，幫助您以較低的預算和較充足的材料完成預實驗的條件探索。初次使用慢病毒顆粒的研究者也可使用陽性對照慢病毒顆粒熟悉實驗過程。2.慢病毒顆?？梢杂糜趧游矬w內（In

次發(fā)現(xiàn)人類和古細菌染色體組織之間的相似性2019/09/23

這項由印第安納大學的研究人員*完成的研究是個發(fā)現(xiàn)人類和古細菌染色體組織之間相似性的研究。這一發(fā)現(xiàn)可以幫助在研究中利用古細菌來理解與細胞基因表達錯誤相關的人類疾病，例如癌癥。這一研究成果公布在9月19日Cell雜志上，文章通訊作者為IUBloomington藝術與科學學院分子與細胞生物化學系主任StephenBell。人類和古細菌染色體具有類似的DNA簇，這一點非常重要，因為某些基因就是根據(jù)它們的折疊方式激活或失活?！癉NA的錯誤捆綁或'折疊'可導致錯誤的基因被打開或關閉，”Bell說，“研究表明

古朵生物：蛋白凝膠染料隨心選，不止是考馬斯藍2019/09/16

與DNA凝膠電泳一樣，蛋白質凝膠電泳也是實驗室中稀松平常的工作。無論是Westernblot還是質譜分析，都離不開蛋白電泳。研究人員通過大?。?D）和電荷（2D）來分辨蛋白質。當然，僅僅分離蛋白是不夠的，它們必須要經(jīng)過染色。染料的選擇有很多，具體選哪種，這取決于靈敏度要求、現(xiàn)有的設備和下游的應用。常規(guī)之選研究人員主要使用三種染料來處理日常的蛋白凝膠：考馬斯藍、銀染和熒光。據(jù)Sigma-Aldrich公司蛋白技術的研發(fā)經(jīng)理JeffreyTurner介紹，染料的選擇基本上可以歸結為“靈敏度vs.速度

出乎意料新發(fā)現(xiàn)：沒有用抗生素也會出現(xiàn)耐藥性2019/09/09

細菌對常見抗生素的耐藥性越來越強。通常，抗性是由抗性基因介導的，抗性基因可以簡單地從一個細菌群跳到另一個細菌群上。一種常見的假設是抗性基因主要在使用抗生素時傳播，這由達爾文理論支持：只有在實際使用抗生素的情況下，抗性細菌才具有優(yōu)于其他細菌的優(yōu)勢。在無抗生素的環(huán)境中，抗性細菌沒有優(yōu)勢。這就解釋了為什么健康專家擔心過量使用抗生素并要求對其使用進行更多限制。然而，由蘇黎世聯(lián)邦理工學院和巴塞爾大學的科學家*的一個研究小組發(fā)現(xiàn)了一種額外的，以前未知的機制，耐藥性在腸道細菌中傳播，這不依賴于抗生素的使用。這

讓陽光照進來，殺死灰塵中的細菌 古朵生物√2019/09/02

近發(fā)表在開放獲取期刊《微生物組》（Microbiome）上的一項研究顯示，讓陽光透過窗子照進房間可以殺死生活在灰塵中的細菌。美國俄勒岡大學的研究者們發(fā)現(xiàn)，在黑暗的房間中平均有12%的細菌存活且能夠繁殖。與之形成對比的是，有陽光照射的房間里只有6.8%的細菌存活，UV照射過的細菌中只有6.1%仍具備繁殖能力。研究的通訊作者DrFahimipour說：“人類大部分時間都在室內，這使得我們不可避免地暴露在攜帶各種細菌、甚至是致病菌的灰塵當中。因此了解我們居住建筑的特點會如何影響灰塵的生態(tài)環(huán)境以及這對我

年輕蛋白質讓核糖核酸展現(xiàn)活力 古朵新聞√2019/08/30

耶魯大學和韋恩州立大學的科學研究顯示，一種復雜的RNA（核糖核酸）與蛋白質共同作用，在蛋白質的幫助下能經(jīng)過整形，重新塑造成合適的形狀。這些存在已久的古老RNA通過不斷進化，在年輕的蛋白質中尋找合適的搭檔，輔助自己完成功能使命。科學家曾經(jīng)認為，絕大部分細胞活動都是由蛋白質控制著，然而近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，多種RNA分子也在大量生物活動中扮演重要角色。這項研究針對的是一種比較大的、具有催化作用的特殊RNA，也就是目前已知的Ⅱ組內含子（groupⅡintrons）。Ⅱ組內含子源于原生生物、真菌、藻類、植物

在NGS建庫過程中，如何避免常見的操作失誤2019/08/26

2013年，哈佛醫(yī)學院的研究人員曾在《NatureReviewGenetics》雜志上發(fā)表了一篇很有意思的綜述，討論了新一代測序（NGS）實驗中錯誤的來源1。文章指出，在樣品制備和文庫制備環(huán)節(jié)，用戶操作失誤（usererror）都是常有的事，比如貼錯標簽或者加錯溶液。然而，測序畢竟不同于核酸純化，后者失敗了大不了重做。對測序而言，一個簡單的移液或混合錯誤有可能讓你付出高昂的代價。無論老板是否nice，測序實驗從頭再來的感受肯定不佳，實驗室需要耗費大量的時間和成本，況且有些樣本還很稀有。不過，每次