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常規(guī)細胞培養(yǎng)方法（原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)）2020/11/23: 初代培養(yǎng)原理將動物機體的各種組織從機體中取出，經(jīng)各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng)。儀器、材料及試劑儀器：培養(yǎng)箱（調(diào)整至37℃），培養(yǎng)瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術(shù)器械、血球計數(shù)板、離心機、水浴箱（37℃）材料：動物組織塊試劑：1640培養(yǎng)基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，dian酒初代消化培養(yǎng)法1.準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面

如何避免免疫熒光的雷區(qū)2020/11/18: 一、實驗的常用方法有直接法和間接法，方法的選擇是實驗的*步：方法直接法步驟將熒光標(biāo)記的特異性抗體（抗原）直接加在抗原（抗體）上，經(jīng)一定的溫度和時間染色，水洗—干燥—封片—鏡檢優(yōu)點操作簡便、特異性高、非特異性染色少缺點敏感性低間接法步驟先用已知未標(biāo)記的特異性抗體（一抗）與抗原反應(yīng)，再用標(biāo)記的抗體（二抗）與其反應(yīng)，形成抗原—抗體—抗體復(fù)合物，水洗—干燥—封片—鏡檢優(yōu)點敏感性強，目前多采用間接法缺點操作復(fù)雜二、我們來看看實驗的常見問題：1、整個細胞片都出現(xiàn)熒光亮點？答：原因有二：一是二抗?jié)舛冗^高，適當(dāng)

如何選擇適合的細胞增殖檢測方法2020/11/18: 細胞增殖檢測的應(yīng)用相當(dāng)廣泛，不論是測試藥物試劑還是生長因子的效果，不論是評估細胞毒性還是分析細胞活性狀態(tài)，您都可能會用到它。細胞增殖檢測一般是檢測分裂中的細胞數(shù)量或者細胞群體發(fā)生的變化。細胞增殖檢測主要分為四類：DNA合成檢測、代謝活性檢測、細胞增殖相關(guān)抗原檢測和ATP濃度檢測。在這些方法中作何選擇，主要取決于您所研究的細胞類型和研究方案。DNA合成檢測DNA合成檢測是目前實驗室中檢測細胞增殖準(zhǔn)確可靠的方式。傳統(tǒng)方法是，將放射性標(biāo)記的3H-胸腺嘧啶與細胞一同孵育幾小時或者孵育過夜。這樣新增殖細胞

自制對照品標(biāo)定方法有哪些？2020/11/17: 常用的對照品標(biāo)定的方法如下：1，常規(guī)標(biāo)定檢測內(nèi)容包括：①色譜純度，HPLC的純度檢查時選擇紫外波長需考慮對照品中雜質(zhì)以及主化合物的吸收強弱，以減少色譜純度的誤差；②水分，一般用KF滴定少用LOD；③溶劑殘留，有時用LOD測水分時殘留溶劑也已被揮發(fā)減重，故采取LOD測水分時可不測RS）；④熾灼殘渣，主要測無機鹽類雜質(zhì)成分；⑤其他雜質(zhì)，此方法的缺點可能會有些無紫外吸收的雜質(zhì)不能被檢測到，或者含有的無機鹽ROI后計量不準(zhǔn)，所以此方法要求對照品純度盡量高些。2，滴定法：選擇合適的滴定方法跟需標(biāo)定物質(zhì)定量

中藥對照品純度如何分析2020/11/16: 由于天然產(chǎn)物的化學(xué)成分結(jié)構(gòu)復(fù)雜，中藥對照品包括多種類型的化合物，分析這些化合物的手段也是多種多樣的，幾乎包括了化學(xué)分析所有常規(guī)方法。每種分析手段都不是萬-能的，只能揭示化合物的一種或部分性質(zhì)，因此綜合使用多種分析方法，從不同方面，不同角度了解樣品的屬性，才能對對照品的純度作出客觀的評價。同時，在中藥對照品的分析過程中也要遵守一定的規(guī)律，避免盲日采用*，面忽略了經(jīng)典方法的價值。1.根據(jù)中藥對照品的使用目的，首先選擇其在法定標(biāo)準(zhǔn)中使用的方法進行檢測，以了解該樣品在特定的使用項B中的行為及存在的問題。

吃維生素也能抗菌啦！真正*的 “抗生素” 要來了2020/11/13: 抗生素是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)重要的發(fā)現(xiàn)之一，自從100年前青霉素被發(fā)現(xiàn)以來，已經(jīng)挽救了數(shù)百萬人的生命。許多由細菌感染引起的疾病——如肺炎、腦膜炎或敗血癥——都能用抗生素成功治療。然而，細菌容易對抗生素產(chǎn)生耐藥性，從而使醫(yī)生難以找到有效的治療方法，特別是近年來出現(xiàn)的多重耐藥且不受大多數(shù)抗生素影響的病原體，通常導(dǎo)致致命后果。因此，*的科學(xué)家都在尋找新的抗生素。哥廷根大學(xué)和馬克斯-普朗克生物物理化學(xué)研究所的研究人員現(xiàn)在描述了一種很有前途的新方法——“抗維生素（antivitamins）”。研究結(jié)果發(fā)表在《Natu

你知道抗體是怎么產(chǎn)生的嗎？2020/11/12: 什么是抗體抗體（antibody，Ab）是B細胞接受抗原刺激后增殖分化為漿細胞所產(chǎn)生的主要存在于血清等體液中的免疫球蛋白（Ig）。免疫球蛋白是具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白。圖1.正常血清電泳分離圖Ig與Ab的區(qū)別：Ig是化學(xué)結(jié)構(gòu)的概念，Ab是生物學(xué)功能的概念。所有的Ab都是Ig，但Ig并非都有抗體活性。圖2.Ig與Ab的范圍免疫球蛋白的存在形式分泌型(SecretedIg,sIg)：分泌入體液中，介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答；膜型(MembraneIg,mIg)：構(gòu)成B細胞膜上的抗原受體。免疫球

細胞培養(yǎng)中常見的生長問題！2020/11/11: 確保充分的細胞生長是細胞培養(yǎng)和收集精-確數(shù)據(jù)的一個關(guān)鍵部分。對于單層生長的細胞，融合度定義為顯微鏡觀察到被一層細胞覆蓋的培養(yǎng)器皿表面積的百分比。比如，50%細胞融合是指一半的培養(yǎng)皿/瓶等的表面被細胞覆蓋。對于懸浮細胞，通常用細胞系或類型的細胞密度衡量其生長過程，但或許也可通過濁度增加和培養(yǎng)基顏色穩(wěn)定評估“融合“。培養(yǎng)中的細胞生長一般發(fā)生在四個階段，如圖所示，隨著時間推移的細胞計數(shù)的對數(shù)形成一個S型曲線(S-型)，不同細胞系和培養(yǎng)物在每個階段需要的時間有很大差異。停滯期：細胞適應(yīng)培養(yǎng)條件的階段，細

微生物菌種保藏的六種方法2020/11/10: 微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處于不活躍或相對靜止的狀態(tài)，才能在一定的時間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，所以，菌種保藏方法雖多，但都是根據(jù)這三個因素而設(shè)計的。保藏方法1．傳代培養(yǎng)保藏法又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細菌用），培養(yǎng)后于4—6℃冰箱內(nèi)保存。2．液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長保藏時間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止

如何降低血清沉淀物的產(chǎn)生2020/11/09: 細胞培養(yǎng)過程中用到多的就是血清，但有時候我們在對血清融化后會出現(xiàn)沉淀。出現(xiàn)沉淀是否血清的品質(zhì)存在問題，今天給大家科普下這些沉淀都是什么，我們?nèi)绾味沤^這種情況。血清中包含絮狀沉淀是什么呢？沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清（400g，1-2分鐘）或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里（一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾）。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至3

微載體培養(yǎng)技術(shù)介紹2020/11/06: （一）概述微載體培養(yǎng)技術(shù)于1967年被用于動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)。該技術(shù)目前已漸日趨完善和成熟，并廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)疫苗、基因工程產(chǎn)品等。微載體培養(yǎng)是目前*的-有發(fā)展前途的一種動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)，其兼具懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點，放大容易。目前微載體培養(yǎng)廣泛用于培養(yǎng)各種類型細胞，生產(chǎn)疫苗、蛋白質(zhì)產(chǎn)品，如293細胞、成肌細胞、Vero細胞、CHO細胞。微載體是指直徑在60.250μm，能適用于貼壁細胞生長的微珠。一般是由天然葡聚糖或者各種合成的聚合物組成。自VanWezel用DEAE-SephadexA

雙熒光素酶檢測的原理和應(yīng)用2020/11/05: 一、熒光素酶報告基因的檢測原理熒光素酶（Luciferase）是生物體內(nèi)催化熒光素(luciferin)或脂肪醛(fireflyaldehyde)氧化發(fā)光的一類酶的總稱，來自于自然界能夠發(fā)光的生物。自然界存在的熒光素酶來自螢火蟲、發(fā)光細菌、發(fā)光海星、發(fā)光節(jié)蟲、發(fā)光魚、發(fā)光甲蟲等。細菌熒光素酶對熱敏感，因此在哺乳細胞的應(yīng)用中受到限制。目前，以北美螢火蟲蟲(Photinuspyralis)來源的熒光素酶基因應(yīng)用的-為廣泛，該基因可編碼550個氨基酸的熒光素酶蛋白，是一個61kDa的單體酶，無需表達后

化妝品微生物超標(biāo)怎么解決？2020/11/04: 化妝品為什么會出現(xiàn)微生物超標(biāo)現(xiàn)象？如果是一個正規(guī)的生產(chǎn)流程，不應(yīng)該出現(xiàn)微生物超標(biāo)現(xiàn)象。因為在我們的生產(chǎn)流程中，每一項都有嚴格的檢測及控制，在生產(chǎn)過程中，我們都會遵循GMP((GoodManufacturePractice良好生產(chǎn)規(guī)范)的標(biāo)準(zhǔn)。在中國，正規(guī)上市的產(chǎn)品都必須具備衛(wèi)生許可證，這個衛(wèi)生許可證也對產(chǎn)品的生產(chǎn)過程做了詳細和嚴格的規(guī)定。其中很多關(guān)鍵環(huán)節(jié)都是在密封或是嚴格控制的衛(wèi)生環(huán)境中進行。這一系列規(guī)定的目的就是要將微生物量減至低，其他的污染物不可能流入進去。如果出現(xiàn)微生物超標(biāo)現(xiàn)象，就有可能是

修復(fù)受損神經(jīng)，水凝膠或可助一臂之力2020/11/03: 外周神經(jīng)組織可以將生物電信號從大腦傳遞到身體其他部位。而外周神經(jīng)的損傷通常會導(dǎo)致慢性疼痛、神經(jīng)紊亂、癱瘓或殘疾。現(xiàn)在，研究人員已經(jīng)開發(fā)出一種可拉伸的導(dǎo)電水凝膠，或許未來可以用于修復(fù)這些類型神經(jīng)的損傷。近日，南京大學(xué)教授沈群東及其合作者在《美國化學(xué)會·納米》雜志（ACSNano）發(fā)表了這項研究結(jié)果。外周神經(jīng)被*切斷的損傷，例如事故造成的深切口，是很難治療的。一種常見的治療策略被稱為自體神經(jīng)移植。它是從身體其他部位移走一段外周神經(jīng)，然后縫在被切斷神經(jīng)的兩端。然而，該手術(shù)并不一定能恢復(fù)神經(jīng)功能，有時還

重組蛋白促溶標(biāo)簽特點及選擇2020/11/02: 重組蛋白表達在現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)發(fā)展中起著重要的推動作用。通過利用宿主實現(xiàn)外源性蛋白表達,為一些重要蛋白尤其是人源蛋白的結(jié)構(gòu)和功能研究的提供了強有力的工具。為了能夠進行后續(xù)的結(jié)構(gòu)功能研究，所獲得的重組蛋白必須可溶，穩(wěn)定，正確折疊以及具有生物活性。然而，實際研究中，這些往往成為獲得一個理想重組蛋白的障礙。重組蛋白表達的可溶性成為首要解決的問題。因此，許多融合標(biāo)簽被引入。本文介紹下常用的促溶標(biāo)簽特點以及選擇，希望對大家實驗中遇到的重組蛋白溶解性問題有所幫助。常用促溶標(biāo)簽特點01麥芽糖結(jié)合蛋白麥芽糖結(jié)合蛋

質(zhì)粒小量提取試劑盒常見問題與解析2020/10/30: 質(zhì)粒小量提取試劑盒常見從1～4mL菌液可以抽提到5～30?g的質(zhì)粒，純度高，OD260/OD280比值一般為1.8-2.0之間，質(zhì)粒可直接用于PCR、酶切、轉(zhuǎn)化測序和體外轉(zhuǎn)錄等后續(xù)實驗。那么在實驗過程中常見問題有哪些，下面跟小編一起來看一下。質(zhì)粒得率低可能原因及解決辦法：1、菌體未活化，生*率低，菌量少。需要活化菌種。2、屬于低拷貝質(zhì)粒，增加菌液的量。3、SolutionB裂解不充分，室溫靜置5min。4、后洗脫體積不夠，洗脫液不少于50?L。質(zhì)粒純度差可能原因：1、SolutionA未加入RN

“干細胞”干什么都行的細胞2020/10/29: 干細胞顧名思義——干什么都行的細胞，在醫(yī)學(xué)界，干細胞又被稱為*干細胞或者萬用細胞，是一類具有自我更新能力的多潛能細胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞或組織器官。干細胞來源于胚胎、胎兒組織和成年組織。人類很多疾病諸如心肌梗塞、糖尿病、帕金森病等，均涉及細胞(如腦細胞、心肌細胞、胰島細胞)的死亡?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，成人身體器官內(nèi)藏著極為稀少的干細胞，當(dāng)身體組織受到破壞或細胞功能衰退時，這些隱伏的干細胞便會活躍起來，替代和修復(fù)死亡、受損及衰老的人體組織和細胞，恢復(fù)正常功能。干細胞技術(shù)顯著的作用

關(guān)于ELISA實驗的一些原理總結(jié)！2020/10/28: ELISA即酶聯(lián)免疫吸附測定，是一類常用的免疫酶技術(shù)。主要方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，然后利用酶標(biāo)記（偶聯(lián)）的抗體或抗原與之孵育，加入顯色劑顯色，通過酶標(biāo)儀測定待測物顏色與標(biāo)準(zhǔn)物顏色的差異，繪制出酶活曲線得出待測物濃度。ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。ELISA實驗中有三種必要的試劑：①固相的抗原或抗體（用于結(jié)合到固相載體上）②標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物）③作用的底物（顯色劑，用于顯色）四種常見ELISA方法1.直接ELISA將抗原固定于ELISA板上，然后用酶標(biāo)抗體直

原代細胞培養(yǎng)的技巧，看完這篇都懂了！2020/10/23: 原代細胞培養(yǎng)的應(yīng)用1、為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段；2、為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件；3、服務(wù)于臨床實踐，用于藥物篩選等。原代細胞培養(yǎng)之分離注意事項1、組織塊培養(yǎng)法1）組織塊接種后的前3天，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動和振動，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。2）加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。3）當(dāng)細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細胞的生長。4）為促進組

如何正確的融化血清！2020/10/22: 做細胞培養(yǎng)實驗經(jīng)常會對血清凍融，怎么才能有效正確的利用血清也有對應(yīng)的方法，今天分析如何融化血清讓實驗更好的完成。與4℃過夜法相比,三步法為什么對血清更好呢？重點有二！其一：關(guān)系到沉淀出現(xiàn)的幾率！記得嗎？血清在融化過程中，瓶子里冰塊的底部你會看見亮亮的蛋白絲在下沉，如同蜂蜜溶于水時的亮線，這就是血清中大量的蛋白在快速融化，而水的熔點高于蛋白，融化的速度是比蛋白慢的。（回想一下高級冰淇淋和大棒冰的區(qū)別，你懂得！）試想，如果采用4℃過夜的方法，1瓶500毫升的血清融化好，大約需要10小時左右，蛋白先融

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