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如何自己動手配制標(biāo)準溶液？2021/05/17

1、自行配制的標(biāo)準溶液必須具備8個基本要求1.1應(yīng)采用具有高純度的溶質(zhì)或基準物質(zhì)(如金屬、金屬氧化物或金屬化合物;酸、堿、金屬有機化合物、適宜的鹽類、有機溶劑等)。1.2為確保配制標(biāo)準溶液的可靠性、準確性,實驗室的設(shè)備、環(huán)境設(shè)施均應(yīng)滿足其要求,(應(yīng)有監(jiān)測、控制和記錄環(huán)境條件。特別對灰塵、電磁干擾、放射、溫度、濕度、供電等)。1.3具有符合稱量要求器具、應(yīng)有正確稱量的電子分析天平,并通過周期性的檢定,有質(zhì)檢部門檢定的證書。1.4要有配制標(biāo)準溶液的純度高的溶劑(采用雙重蒸餾去離子水、高純濃度的酸、堿

支原體基本知識和檢測方法2021/05/14

支原體又稱霉形體，是很小的原核細胞，*沒有細胞壁．菌體形態(tài)多變，具高度多形性，球形、梨形、分枝的或螺旋的絲狀等。營養(yǎng)要求苛刻，在高血清量的復(fù)雜培養(yǎng)基上生長，在固體培養(yǎng)基上菌落呈油煎荷包蛋樣特征性外觀。培養(yǎng)基：牛心湯復(fù)合培養(yǎng)基等。分離培養(yǎng)：無菌采取肺、肝、脾、腎組織，直接剪成小塊放在固體培養(yǎng)基上劃一直線，再用無菌鉑耳環(huán)在與其垂直方向劃線，或者將組織塊剪碎磨成勻槳，經(jīng)液體培養(yǎng)基連續(xù)系列稀釋后培養(yǎng)．若當(dāng)液體材料為牛乳、排泄物、胎液等，可直接取0.2ML接種于液體培養(yǎng)基或取0.1ML接種于固體培養(yǎng)基。固

初學(xué)者如何做好蛋白表達？2021/05/13

重組蛋白表達技術(shù)可以用來分析基因調(diào)控以及研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能。無論是體內(nèi)功能研究還是用于結(jié)構(gòu)研究的大規(guī)模生產(chǎn)，以及生物治療領(lǐng)域的藥物開發(fā)都需要用到蛋白表達技術(shù)。1、蛋白質(zhì)通用合成路徑DNA—mRNA—蛋白實際操作流程為：1.克隆或合成目的基因2.載體構(gòu)建3.蛋白表達與純化4.蛋白的大量表達與純化（或無）2、克隆或合成目的基因典型的表達載體包括至少4個主要元件：目的基因表達框（包括啟動子和基因終止或poly(A)信號）細菌的復(fù)制起始點（ori）特定宿主的抗生素選擇框（如潮霉素B、霉酚酸、嘌呤霉素、

雜質(zhì)對照品的介紹以及標(biāo)準要求2021/05/12

對照品（標(biāo)準品）是執(zhí)行藥品質(zhì)量標(biāo)準的實物對照，是量值傳遞的重要載體，是用來檢查藥品質(zhì)量的一種特殊的專用量具、測量藥品質(zhì)量的基準、確定藥品真?zhèn)蝺?yōu)劣的物質(zhì)對照，也是作為校正測試儀器與方法的物質(zhì)標(biāo)準。對國家藥品標(biāo)準而言，它是國家頒發(fā)的一種藥品計量、定性的標(biāo)準物質(zhì)。藥品標(biāo)準物質(zhì)必須具備材料均勻、性能穩(wěn)定、量值準確等條件，才能發(fā)揮其統(tǒng)一量值的作用。在藥物研發(fā)當(dāng)中，對照品（標(biāo)準品）涉及量值溯源、產(chǎn)品定性、雜質(zhì)控制等重要環(huán)節(jié)，其制備和標(biāo)定情況與藥品的質(zhì)量研究、穩(wěn)定性研究乃至藥理毒理學(xué)研究中劑量的確定等臨床前基

試驗中抗體該如何選擇？2021/05/11

當(dāng)您選擇抗體時，一些有用的建議如下:通過查閱文獻，查找使用過類似抗體的實驗室進行咨詢；詢問其他實驗室成員是否已經(jīng)用過了適合您實驗的抗體；檢查抗體的克隆性、應(yīng)用適應(yīng)性、宿主物種和種屬反應(yīng)性等各種數(shù)據(jù)。查看供應(yīng)商提供的圖片和數(shù)據(jù)——數(shù)據(jù)是否可信、實驗結(jié)果優(yōu)劣鑒定？參考引用該抗體的任何論文和論文中數(shù)據(jù)的表現(xiàn)選擇適合自己的抗體。一抗選擇01確認研究用途研究主題是什么？抗體的克隆性質(zhì)？02抗體的種屬？樣本的種屬來源需要和抗體的種屬來源不同。像westernblot這樣的實驗應(yīng)用，樣本是沒有內(nèi)源性免疫球蛋白

血清、血漿和全血的區(qū)別在哪里？2021/05/10

血清血漿和全血的差別，色調(diào)不一樣，全血是鮮紅色的，血細胞是淺黃色全透明液體。比例不一樣，全血比例高，血細胞比例低。血細胞與全血帶有的成份不一樣，全血中帶有血細胞，白細胞計數(shù)和血小板，還帶有各種各樣凝血因子。而血細胞中沒有各種各樣紅細胞，沒有各種各樣凝血因子，其他成份血細胞和全血是同樣的。全血是將身體血液收集到取血袋內(nèi)所產(chǎn)生的化合物，包括紅細胞和血液的全部成份。血細胞就是指血液凝結(jié)之后，在血液中去除纖維蛋白原及一些凝血因子之后分離出來出的淺黃色全透明液體，或是就是指纖維蛋白原早已被除去的血液，它的

細胞又雙叒叕污染了，怎么解決？2021/05/08

在細胞培養(yǎng)過程中，廣大科研工作者一直飽受微生物污染的困擾，幾乎所有科研單位的細胞房都曾經(jīng)遭受過細菌、真菌、支原體、黑膠蟲的污染，尤其是一些珍貴的細胞種子，一旦招惹上這幾個家伙，甚至面臨“絕種”的危險。針對細胞培養(yǎng)當(dāng)中面臨的蕞普遍的問題，作為科研工作者的我們必須清楚認識這些微生物，并通過技術(shù)手段判斷細胞遭受了哪種污染，準確的對癥下藥，才能為我們的細胞保駕護航。1細菌污染1.1細菌污染的鑒別細菌污染是細胞培養(yǎng)當(dāng)中最常出現(xiàn)的污染類型，槍頭不小心碰到瓶壁、手不小心從培養(yǎng)瓶口處穿過、培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)瓶等等，

工業(yè)檢支原體與科研檢支原體的區(qū)別？2021/05/06

工業(yè)包括生物藥生產(chǎn)、CAR-T、干細胞治療、疫苗生產(chǎn)等，需要對主細胞庫、病毒收獲液、體外擴增的細胞等進行支原體檢查。該檢查的方法依據(jù)中國藥典。科研檢支原體則需要保證細胞中沒有支原體污染，沒有詳細的方法規(guī)定。那么，工業(yè)和科研檢支原體還有哪些區(qū)別呢？1.方法上：工業(yè)可使用培養(yǎng)法、指示細胞培養(yǎng)法和NAT法（核酸擴增技術(shù)）。NAT法最常見的就是PCR和熒光定量PCR。只限定了這三種。NAT在方法驗證后，可以替代前面兩種方法。它尤其適合CAR-T等的放行檢測?？蒲袆t可采用各種方法，但一般不采用培養(yǎng)法，因為

試劑老是稱不準怎么解決？2021/04/29

當(dāng)你老是稱不準時，你有好好分析是什么原因造成的嗎？總的來說，實驗室分析樣品稱量不準確的原因有很多種，大體可分為分析天平?jīng)]校準、環(huán)境及樣品物理因素影響和操作不當(dāng)?shù)?個方面的原因。所以，稱不準就從這幾方面來找原因吧。分析天平在使用前沒有經(jīng)過校準一臺分析天平在使用之前，首先要確認它的正確性是否合格，否則該天平所稱量的正確性得不到保證。分析天平從shou次使用起，應(yīng)對其定期校準。連續(xù)使用的天平，大約每星期校準一次。校準時應(yīng)按規(guī)定程序進行，必須使用標(biāo)準砝碼進行校準，否則將起不到校準的作用。分析天平安裝不正

菌種為何會衰退？菌種衰退原因及預(yù)防措施！2021/04/28

微生物長期受到外界的影響，遺傳性狀必然發(fā)生某些變異。正是由于變異的存在才使得生物向前進化。然而由于突變的存在，菌種在培養(yǎng)或保藏過程中，可能會出現(xiàn)某些優(yōu)良生產(chǎn)性狀的劣化、遺傳標(biāo)記丟失、典型特征改變等現(xiàn)象，稱為菌種衰退。比如蘇云金芽孢桿菌由于菌種衰退，導(dǎo)致其新生的菌體芽孢和伴孢晶體都比較?。槐２氐纳抽T氏菌鞭毛抗原丟失，導(dǎo)致H多價血清不凝固等。01、菌種衰退原因菌種衰退的根本原因是有關(guān)基因的負突變。如果控制產(chǎn)量的基因發(fā)生負突變，則表現(xiàn)為產(chǎn)量下降；如果控制孢子生成的基因發(fā)生負突變，則產(chǎn)生孢子的能力下降。

免疫熒光技術(shù)你真的會嗎？2021/04/27

一、直接免疫熒光法（一）基本原理將熒光素標(biāo)記在相應(yīng)的抗體上，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)。其優(yōu)點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少。缺點是敏感性偏低；而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。（二）試劑與儀器磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4熒光標(biāo)記的抗體溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS進行稀釋緩沖甘油：分析純無熒光的甘油9份+pH9.20.2M碳酸鹽緩沖液1份配制搪瓷桶三只（內(nèi)有0.01m

蘆丁的提取及鑒定實驗報告2021/04/26

概述蘆?。≧utin）廣泛存在于植物界中，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)含蘆丁的植物至少在70種以上，如煙葉、槐花、蕎麥和蒲公英中均含有。尤以槐花米（為植物Sophorajaponica的未開放的花蕾）和蕎麥中含量蕞高，可作為大量提取蘆丁的原料。蘆丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羥基與蕓香糖（Rutinose）〔為葡萄糖（Glucose）與鼠李糖（Rhamnose）組成的雙糖〕脫水合成的苷。蘆丁為淺黃色粉末或極細的針狀結(jié)晶，含有三分子的結(jié)晶水，熔點為174~178℃，無水物188~190℃。溶解度：冷水中為

熒光定量PCR（qPCR）使用方法2021/04/25

熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記，使PCR擴增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進行DNA擴增反應(yīng)的實時監(jiān)測，簡稱qPCR。（經(jīng)典法）1)符合歐洲藥典、中國藥典要求，更適合細胞治療，CAR-T，抗體藥、疫苗等臨床項目申報和質(zhì)檢。2）樣本需先做DNA抽提。抽提后樣本加入量為10μl。3)廠家可協(xié)助完善方法驗證步驟。支原體熒光定量PCR(qPCR)檢測試劑盒（一步法）1）適合科研單位檢測，或單位內(nèi)檢，用熒光定量PCR(q

影響微生物生長與死亡的因素2021/04/23

一個微生物細胞在合適的外界條件下，不斷的吸收營養(yǎng)物質(zhì)，并按自己的代謝方式進行新陳代謝。如果同化作用的速度超過了異化作用，則其原生質(zhì)的總量（重量，體積，大?。┚筒粩嘣黾?，于是出現(xiàn)了個體的生長現(xiàn)象。如果這是一種平衡生長，即各細胞組分是按恰當(dāng)?shù)谋壤鲩L時，則達到一定程度后就會發(fā)生繁殖，從而引起個體數(shù)目的增加，這時，原有的個體已經(jīng)發(fā)展成一個群體。隨著群體中各個個體的進一步生長，就引起了這一群體的生長，這可從其體積、重量、密度或濃度作指標(biāo)來衡量。微生物的生長不同于其他生物的生長，微生物的個體生長在科研上有

凝膠層析（凝膠過濾法）基本原理2021/04/22

凝膠層析也稱凝膠過濾法，是20世紀60年代發(fā)展起來的一種簡便有效的生物化學(xué)分離分析方法。這種方法的基本原理是用一般的柱層析方法使相對分子質(zhì)量不同的溶質(zhì)通過具有分子篩性質(zhì)的固定相（凝膠），從而使物質(zhì)分離。用作凝膠的材料有多種，如交聯(lián)葡聚糖、瓊脂糖、聚丙烯-酰胺凝膠、聚苯乙-烯和多孔玻璃珠等?，F(xiàn)以利用交聯(lián)葡聚糖分離物質(zhì)和測定相對分子質(zhì)量為例說明凝膠層析法的基本原理和應(yīng)用。交聯(lián)葡聚糖（商品名Sephadex）是由細菌葡聚糖（以右旋葡萄糖為殘基的多糖）用交聯(lián)劑環(huán)氧氯丙-烷交聯(lián)形式的有三維空間的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物

細菌簡單染色實驗方法2021/04/21

簡單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。此法操作簡便，適用于菌體一般形狀和細菌排列的觀察。實驗方法原理：常用堿性染料進行簡單染色，這是因為：在中性、堿性或弱酸性溶液中，細菌細胞通常帶負電荷，而堿性染料在電離時，其分子的染色部分帶正電荷（酸性染料電離時，其分子的染色部分帶正電荷）。因此堿性染料的染色部分很容易與細菌結(jié)合使細菌著色。經(jīng)染色后的細菌細胞與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易于識別，常用作簡單染色的染料有：美藍、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等。當(dāng)細菌分解糖類產(chǎn)酸使培養(yǎng)基pH下降時，細菌所帶正

菌落總數(shù)超標(biāo)的原因及解決方案2021/04/20

菌落總數(shù)就是指在一定條件下每克（每毫升）檢樣所生長出來的菌落數(shù)。菌落總數(shù)測定是用來判定食品被細菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量，它反映食品在生產(chǎn)過程中是否符合衛(wèi)生要求，菌落總數(shù)的多少在一定程度上標(biāo)志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣。食用菌落總數(shù)超標(biāo)的食品，可能會引起急性中毒、嘔吐、腹瀉等癥狀，危害人體健康安全。那么，菌落總數(shù)超標(biāo)的原因是什么?物料物料主要包括各種原輔料、內(nèi)包材、生產(chǎn)用水和冰等，若各種料原始微生物含量較高，還是有增加后期產(chǎn)品菌落總數(shù)超標(biāo)的風(fēng)險；因此我們應(yīng)有針對性的對原輔料包材進行評估，制定一定的驗收要求

細胞培養(yǎng)條件對蛋白質(zhì)糖基化的影響2021/04/19

糖基化可能會影響蛋白質(zhì)的半衰期、免疫原性、結(jié)合活性和穩(wěn)定性。蛋白糖基化是一個復(fù)雜的過程，包括碳水化合物部分的連接，以及可能通過蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的天冬酰胺（N-連接）或絲氨酸/蘇氨酸（O-連接）氨基酸連接的位置。在哺乳動物細胞培養(yǎng)過程中，使用不同的細胞系培養(yǎng)可能會在可能發(fā)生的糖基化類型上產(chǎn)生重大差異。糖基化的這些差異可能會對所產(chǎn)生的治療性蛋白質(zhì)的質(zhì)量產(chǎn)生重大影響，細胞克隆的選擇、所用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和補料培養(yǎng)基也會對糖基化產(chǎn)生影響。蛋白質(zhì)藥物在生產(chǎn)中使用的宿主細胞的選擇和生物反應(yīng)器條件會顯著影響蛋白質(zhì)產(chǎn)品

細胞轉(zhuǎn)染率低 轉(zhuǎn)染試劑要全背鍋嗎？2021/04/16

目前細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)主要分為三大類：化學(xué)法、物理法及生物學(xué)法。但是沒有一種方法是通用并且準確無誤的，所以只有依據(jù)自己的實驗要求或者實驗探索選擇理想的方法，才能獲得漂亮的實驗結(jié)果。當(dāng)然也可以在前輩們發(fā)的文獻中多看看，前車之鑒可以減少很多不必要的花費。細胞轉(zhuǎn)染低都是PCR試劑的問題嗎？PCR純度不夠確實會有這樣的問題，所以選擇PCR試劑很重要主要還是以下幾點影響：1.其他微生物污染您覺得您養(yǎng)的細胞，不，不，不，可能您只知道您養(yǎng)的是細胞，你不知道的是您的細胞可能背著您養(yǎng)了一群小三，比如支原體，病毒，黑膠蟲

蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定技術(shù)流程 @古朵生物2021/04/15

蛋白質(zhì)組（Proteome）的概念，蕞早由澳大利亞Macquarie大學(xué)的Wilkins和Williams于1994年首先提出的，是指一個基因組（Genome），或一個細胞、組織表達的所有蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)組學(xué)（Proteomics）以細胞、組織或生物體全體蛋白質(zhì)為研究對象，通過高通量的色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測樣品所有蛋白質(zhì)及其變化規(guī)律，包括蛋白質(zhì)的表達水平，翻譯后的修飾，蛋白與蛋白相互作用等，利用生物信息技術(shù)從整體的角度獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生，細胞代謝等過程的變化，闡明生-理或病理條件下的變化