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微生物檢驗培養(yǎng)與分離方法2021/06/16

大多數(shù)細菌均可以通過人工方法培養(yǎng)，而衣原體和病毒的分離培養(yǎng)往往需要活組織、雞胚、特殊細胞株及動物接種。只有將微生物培養(yǎng)出來才能對它進行研究、鑒定和應用。一、接種與分離方法根據(jù)待檢標本的性質(zhì)、培養(yǎng)目的和所用培養(yǎng)基的種類，采用不同的接種方法。1．平板劃線分離培養(yǎng)法對混有多種細菌的臨床標本，采用劃線分離和培養(yǎng)，使原來混雜在一起的細菌沿劃線在瓊脂平板表面分離，得到分散的單個菌落，以獲得純種。臨床送檢的標本如痰、咽試子、泌尿生殖道的分泌物和糞便等細菌檢驗均需要借助瓊脂平板劃線分離目的菌。平板劃線分離法通常

細胞轉(zhuǎn)染的原理、操作步驟以及小技巧2021/06/15

細胞轉(zhuǎn)染的方法主要包括：電穿孔法、磷酸鈣沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、病毒介導的轉(zhuǎn)染等，理想的細胞轉(zhuǎn)染方法是具有高轉(zhuǎn)染效率、對細胞的毒性作用小等，本文主要介紹細胞轉(zhuǎn)染常用的方法-脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理和操作步驟等。一、脂質(zhì)體(Liposome)轉(zhuǎn)染方法原理脂質(zhì)體作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具，已經(jīng)研究的十分廣泛，中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導入細胞膜內(nèi)。帶正電的陽離子脂質(zhì)體，DNA并沒有預先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負電的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復合物，從而

pH對酶促反應速度的影響2021/06/11

【目的和要求】1.了解pH對酶促反應速度的影響。2.學習測定酶的蕞適pH的方法。【實驗原理】酶促反應受環(huán)境pH的影響極為顯著。通常各種酶只有在一定的pH范圍內(nèi)才表現(xiàn)它的活力，一種酶表現(xiàn)其活性蕞高時的pH值，稱為該酶的蕞適pH。低于或高于酶的蕞適pH時，酶的活性逐漸降低。不同酶的蕞適pH值不同。本實驗仍以乳酸脫氫酶催化的反應為例，學習測定酶的蕞適pH的方法?！緦嶒炘噭┖推鞑摹浚ㄒ唬┰噭?.不同pH值的緩沖液:100ml0.33M檸檬酸，100ml0.33M磷酸，3.54g硼-酸，343ml1MN

蛋白定量BCA法 VS Bradford法實驗分析2021/06/10

精-確的蛋白質(zhì)定量是蛋白質(zhì)相關實驗所必需的，這些實驗涉及分子生物學，細胞生物學，生物化學，發(fā)育生物學和神經(jīng)科學的研究課題。依托不同的科學原理，目前已經(jīng)發(fā)展出多種不同的蛋白測定方法，科研工作者廣泛使用的方法比如紫外吸收法（UV），雙縮脲法，考馬斯亮藍法（Bradford）、Folin-酚試劑法（Lowry）、BCA（BicinchoninicAcid）法、凱氏定氮法等等，各有千秋。今天小編就BCA法，Bradford法，2種常見蛋白定量方法的原理、優(yōu)缺點以及BCA法實驗操作步驟給大家做詳細介紹，看

這些問題才是導致ELISA測定結(jié)果出錯的元兇！2021/06/09

ELISA即酶聯(lián)免疫吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。Engvall和Perlmann于1971年蕞先應用該法進行了IgG定量測定，并命名為"enzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA)"。ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗體）結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗體）與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標抗原（或抗體），而且此酶標抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③測定時將受檢標本（抗體或抗原）和酶標抗原（或抗體）按不同步驟與固相載體表面的

細胞培養(yǎng)實驗中為何少不了牛血清？2021/06/08

許多臨床和做科研的小伙伴們都要涉及到細胞培養(yǎng)，在細胞培養(yǎng)實驗中，血清無疑成為影響實驗成功與否的重要因素，而在眾多血清之中，牛血清是蕞為常用的。牛血清是細胞培養(yǎng)中用量蕞大的天然培養(yǎng)基，其中含有豐富的細胞生長所必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。牛血清是一種成分復雜的混合物，而且血清的組成及含量通常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而存在差異。牛血清主要成分有蛋白質(zhì)，多肽類，激素類，其他成分如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。我們都知道牛血清根據(jù)取材時間不同而有不同的

血清瓶在細胞培養(yǎng)領域的應用2021/06/07

細胞培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展至今已經(jīng)非常成熟，細胞生長需要滿足環(huán)境、溫度、滲透壓、PH值等各種要求，在各種合成培養(yǎng)基提供基礎營養(yǎng)物質(zhì)之外，還需根據(jù)不同細胞和不同的培養(yǎng)目的添加血清等物質(zhì)，促進細胞生長。所以，血清瓶在細胞培養(yǎng)領域具有較大的應用范圍。血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復雜的混合物，主要包括胎牛血清、小牛血清、成牛血清、馬血清、羊血清、雞血清、兔血清等，其中以胎牛血清的使用最為普遍。血清提供的是細胞外基質(zhì)、生長因子和轉(zhuǎn)鐵蛋白等重要物質(zhì)，要根據(jù)不同的細胞和不同的研究目的決定添加血清的比例。10

比較建模法預測蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)2021/06/04

比較建模法(comparativemodelingmethod)是基于知識的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預測方法，又稱為同源結(jié)構(gòu)預測，是根據(jù)大量已知的蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)來預測序列已知而結(jié)構(gòu)未知的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。按照目前的定義，若待模型構(gòu)建蛋白質(zhì)的序列與模板序列經(jīng)比對(alignment)后的序列同源性(sequenceidentity)在40%(也有人認為在35%)以上，則它們的結(jié)構(gòu)可能屬于同一家族，它們是同源蛋白(homology)可以用同源蛋白模型構(gòu)建的方法預測其三維結(jié)構(gòu)。因為它們可能是由同一種蛋白質(zhì)分化而來，具有相

如何清除老化或廢棄紅細胞？2021/06/03

由麻省總醫(yī)院(MGH)的研究人員領導的一項研究駁斥了過去關于老化或廢棄紅細胞在何地及如何被清除，及它們的鐵原子保留下來供新細胞使用機制的認識。他們的研究結(jié)果在線發(fā)表在《自然醫(yī)學》（NatureMedicine）雜志上，有可能促成改善對貧血與鐵中毒的治療或預防。健康紅細胞(RBCs)的平均壽命是120天，但在某些病理狀況下，如敗血癥和鐮狀細胞病一類干擾了RBCs正常生成的疾病中它們的壽命會縮短。在冠狀動脈搭橋手術(shù)或透析過程中這些細胞也可以受損，輸血有可能包含了在采集、儲存和管理過程中受損的RBCs

細胞株開發(fā)的那些事兒2021/06/02

工程細胞株開發(fā)涉及細胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染，單細胞克隆及單克隆源性驗證，蛋白表達及結(jié)構(gòu)特征篩選及鑒定，蕞終獲得優(yōu)質(zhì)的細胞株。穩(wěn)定細胞株廣泛用于許多重要的應用，包括生物制品（如重組蛋白和單克隆抗體）生產(chǎn)、藥物篩選和基因功能研究。開發(fā)穩(wěn)定細胞株的過程通常始于將所需的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至選定的宿主細胞，一般是CHO或HEK293細胞。轉(zhuǎn)染后，研究人員隨后篩選和定量分析高表達的細胞克隆。一旦檢測到這些高產(chǎn)細胞株，便進一步對這些細胞和其產(chǎn)生的蛋白質(zhì)進行驗證。傳統(tǒng)上用于細胞株開發(fā)的手動篩選方法耗時且需要大量勞力，因此對于此類工

防止RNA酶污染的方法有哪些？2021/05/31

防止RNA酶污染的措施1.所有的玻璃器皿均應在使用前于180℃的高溫下干烤6hr或geng長時間。2.塑料器皿可用0.1%DEPC水浸泡或用氯-仿沖洗（注意：有機玻璃器具因可被氯-仿腐蝕，故不能使用）。3.有機玻璃的電泳槽等，可先用去污劑洗滌，雙蒸水沖洗，乙醇干燥，再浸泡在3%H2O2室溫10min，然后用0.1%DEPC水沖洗，晾干。4.配制的溶液應盡可能的用0.1%DEPC，在37℃處理12hr以上。然后用高壓滅菌除去殘留的DEPC。不能高壓滅菌的試劑，應當用DEPC處理過的無菌雙蒸水配制，

電泳后的凝膠染色實驗2021/05/28

實驗概要本文介紹了電泳后主要的凝膠染色方法，包括：標準考馬斯亮藍染色法、快速考馬斯亮藍染色法、凝膠銨銀染色法、凝膠中性銀染色法及凝膠銅染色法。實驗步驟1.標準考馬斯亮藍染色法1)電泳后，將凝膠轉(zhuǎn)入一潔凈的玻璃或塑料容器中。加入5倍于凝膠體積的0.25%考馬斯亮藍R-250(溶解于50%甲醇和10%乙酸中)；2)室溫下振搖溫育4h至過夜；3)去除染色液，收集保存可重復使用20-40次；4)依次在25%甲醇和7.5%乙酸中室溫振搖下脫色。靈敏度為0.1-0.5ug蛋白／每條帶。注：使用加熱的染色液或

微生物實驗室的安全管理要注意哪些方面？2021/05/27

實驗室的種類非常多，可以按學科劃分、按實驗室特性劃分、按行業(yè)劃分。按學科劃分可分為化學實驗室、物理實驗室、生物實驗室，而生物實驗室又分為動物學實驗室、植物學實驗室和微生物實驗室。今天小編就來給大家介紹下微生物實驗室。微生物實驗室的安全管理本質(zhì)是通過實驗室合理布局和結(jié)構(gòu)、使用合適的建筑材料、配備相關設施設備、通過各種科學操作，來確保試驗人員安全、周邊環(huán)境及生態(tài)安全以及微生物因子質(zhì)量與安全。做好3點確保：1、確保試驗人員安全就要確保實驗人員與微生物因子的隔離，以及所處的試驗環(huán)境清潔；2、確保環(huán)境及生

兩大蛋白質(zhì)染色主流方法大比較2021/05/26

常用的蛋白質(zhì)染色試劑分為已考馬斯亮藍為代表的有機試劑染色、銀染、熒光染色及同位素顯色。其中考馬斯亮藍染色法的應用較為廣泛，現(xiàn)將其與其他的蛋白質(zhì)染色方法(主要是銀染法)作一比較，幫助大家更好地去選擇合適的蛋白質(zhì)染色方法。蛋白質(zhì)的染色常用的有4類：有機試劑染色、銀染、熒光染色及同位素顯色。其中有機試劑染色以考馬斯亮藍染色法(Coomasiebrilliantblue，CBB)為代表，在蛋白質(zhì)分析中常用，但對低豐度蛋白質(zhì)的顯現(xiàn)較差;銀染靈敏度雖高，卻常與質(zhì)譜不兼容;熒光染色以SYPRO試劑為主。蛋白質(zhì)

化學試劑純度與分級標準你知道嗎？2021/05/25

由于科研的進-步，化學試劑的使用也越來越多，為了使各種規(guī)格和化學試劑實行標準化和控制試劑產(chǎn)品的質(zhì)量，并使買賣雙方在發(fā)生爭議時有據(jù)可依，人們便制定了《試劑標準》。為了保-證試劑質(zhì)量，試劑還需要進行多種檢驗。我們就討論一下試劑規(guī)格和試劑標準，并介紹試劑檢驗中的一些注意事項，希望對大家有所幫助。什么是試劑規(guī)格？試劑規(guī)格又稱試劑級別或類別。一般按實際的用途或純度、雜質(zhì)含量來劃分規(guī)格標準。目前，國外試劑廠生產(chǎn)的化學試劑的規(guī)格趨向于按用途劃分。試劑規(guī)格按用途劃分的優(yōu)點簡單明了，從規(guī)格即可知此試劑的用途，用戶

PCR實驗室污染？古朵教你如何避免2021/05/24

PCR檢測因其高靈敏度、快速、操作方便等優(yōu)勢已經(jīng)被廣泛應用，不過正是由于它靈敏度*，極微量的污染源都有可能導致檢測結(jié)果的假陽性，因此，如何避免以及處理實驗室污染，對PCR人來說是一門必修課。01、實驗室污染分類樣本間交叉污染主要是在采（?。拥倪^程中，由于取樣工具之間的交叉造成污染；或者在核酸提取的過程中，由于移液器、離心管等使用不當導致的污染。?PCR試劑的污染主要是在PCR試劑配制過程中，由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染?？寺≠|(zhì)粒的污染在實驗室操作中經(jīng)常會用到陽性

古朵生物：關于雜質(zhì)你真的了解嗎2021/05/21

一、前言1.雜質(zhì)的定義：任何影響藥物純度的物質(zhì)統(tǒng)稱為雜質(zhì)，但需要注意的是原料藥中不屬于活性成分的任何成分，制劑中不屬于活性成分或輔料的任何成分。2.雜質(zhì)的來源原料藥中雜質(zhì)的來源：合成工藝（試劑、溶劑、催化劑、中間體、副產(chǎn)物、副反應產(chǎn)物等）；生產(chǎn)器具、生產(chǎn)設備（生產(chǎn)器具、生產(chǎn)設備中的成分及其降解產(chǎn)物等）；生產(chǎn)環(huán)境（通過GMP控制）；包裝材料或包裝容器（浸出物等）；運輸及儲存（降解產(chǎn)物等）制劑中雜質(zhì)的來源：處方（原料藥引入的雜質(zhì)、輔料引入的雜質(zhì)、主輔料相互作用產(chǎn)生的加合物等）；制劑工藝（制粒、壓片工

細胞培養(yǎng)、凍存、復蘇的流程2021/05/20

一、準備工作準備工作對開展細胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。準備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試，具體內(nèi)容可參閱有關文獻。二、取材在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經(jīng)過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的shou次培養(yǎng)稱為

細菌在培養(yǎng)基上的生長特性你知道嗎2021/05/19

1.固體培養(yǎng)基標本或液體培養(yǎng)物劃線接種到固體培養(yǎng)基表面后，單個細菌經(jīng)分裂繁殖可形成一個肉眼可見的細菌集團，稱為菌落(colony)。(1)菌落的形態(tài)特征：大小、形狀(露滴狀、圓形、菜花樣、不規(guī)則等)、突起或扁平、凹陷、邊緣(光滑、波形、鋸齒狀、卷發(fā)狀等)、顏色(紅色、灰白色、黑色、綠色、無色、黃色等)、表面(光滑、粗糙等)、透明度(不透明、半透明、透明等)和粘度等。據(jù)細菌菌落表面特征不同，可將菌落分為3型：①光滑型菌落(S型菌落)：菌落表面光滑、濕潤、邊緣整齊，新分離的細菌大多呈光滑型菌落。②粗

細胞凍存中的常見問題解答2021/05/18

我們都知道，細胞如果要長期保存，需要凍存起來放液氮保存。那怎么樣凍存細胞才能保證細胞能正常復蘇，不至于凍存死亡呢？下面我們就來講講細胞凍存應該注意的一些地方。1.保持凍存前細胞狀態(tài)良好凍存前一定要保證細胞狀態(tài)良好，細胞處于對數(shù)生長期，否則不管后面怎么處理，凍存后的細胞狀態(tài)必然有影響。若細胞密度偏高，培養(yǎng)基已經(jīng)略微變黃，細胞狀態(tài)正常，需要換液培養(yǎng)2h以上再凍存細胞；若已*變黃，細胞死亡超過20%，需要傳代后再重新培養(yǎng)至狀態(tài)正常后再凍存細胞。2.消化、吹打細胞按盡量輕柔如何正確消化、吹打細胞在前面已