細(xì)胞培養(yǎng)從原理上來(lái)說(shuō)并不復(fù)雜，所需設(shè)備也比較簡(jiǎn)單，但它仍是一份需要耐心的工作。針對(duì)不同細(xì)胞，培養(yǎng)時(shí)需根據(jù)細(xì)胞特性選擇不同的包被液，消化液等。對(duì)于培養(yǎng)貼壁能力較弱的細(xì)胞或原代細(xì)胞時(shí)，為了促進(jìn)細(xì)胞貼壁需要對(duì)培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿等耗材進(jìn)行包被處理。目前sciencellzui主要的包被液有多聚賴氨酸(Poly-L-Lysine, Cat. #0403 or Cat. #0413)、牛血漿纖維粘連蛋白（Bovine Plasma Fibronectin，Cat. #8248）、0.2％的明膠溶液（0.2% Gelatin Solution，Cat. #0423）。

 

 

多聚賴氨酸是一種合成化合物，是帶正電荷的氨基酸，通過(guò)改變培養(yǎng)基質(zhì)表面的電極來(lái)促進(jìn)細(xì)胞貼壁。除了促進(jìn)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，包被液多聚賴氨酸包被后能提高原代細(xì)胞的存活率和促進(jìn)神經(jīng)突長(zhǎng)出。ScienCell公司多聚賴氨酸（Poly-L-Lysine, Cat. #0403 or #0413）分子量70 - 150 kDa，*以2 ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶，37℃孵箱1小時(shí)或4℃冰箱過(guò)夜。人口腔角質(zhì)細(xì)胞（Cat. #2610）等需用多聚賴氨酸進(jìn)行包被，以促進(jìn)細(xì)胞貼壁。ScienCell公司的包被液牛血漿纖維粘連蛋白（Bovine Plasma Fibronectin, Cat. #8248）使用親和色譜法自牛血漿提純，是促進(jìn)細(xì)胞貼壁和生長(zhǎng)的理想基質(zhì)。適用于人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（Cat. #6100）、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Cat. #8000）等內(nèi)皮細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞等，纖維粘連蛋白分子量440-500kDa的糖蛋白，存在于細(xì)胞表面蛋白和血漿中，它可與細(xì)胞膜表面受體和細(xì)胞外基質(zhì)成分結(jié)合；明膠是來(lái)自于膠原的高分子量水溶蛋白混合物，sciencell公司0.2％的明膠溶液（0.2% Gelatin Solution, Cat. #0423）用于包被培養(yǎng)器皿以促進(jìn)細(xì)胞貼壁，*用于分化的人胚胎干細(xì)胞，某些原代細(xì)胞和永生化細(xì)胞。不管是原代細(xì)胞還是細(xì)胞系，如果想達(dá)到*效果請(qǐng)根據(jù)細(xì)胞類型進(jìn)行選擇。

 

 

 細(xì)胞傳代過(guò)程中消化是至關(guān)重要，不同的細(xì)胞對(duì)應(yīng)的消化液不同，快來(lái)看看古朵生物強(qiáng)勢(shì)推出的胰酶吧！sciencell公司原代細(xì)胞傳代時(shí)需要使用0.05%胰酶消化液( 0.05%Trypsin/EDTA Solution，Cat. #0183）或者可用DPBS對(duì)0.25%胰酶消化液( 0.25%Trypsin/EDTA Solution，Cat. #0103）稀釋后使用。對(duì)于細(xì)胞系通常使用0.25%胰酶溶液進(jìn)行消化，但是有些細(xì)胞對(duì)胰酶作用比較敏感，例如：HK-2人腎上皮細(xì)胞 、MCF 10A人ru腺細(xì)胞等，*使用0.05%胰酶消化，以減小胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。


細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，zui大限度的保存細(xì)胞活力是我們凍存細(xì)胞的一致目標(biāo)。目前細(xì)胞凍存多采用二甲基亞砜（DMSO）作保護(hù)劑，這種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。強(qiáng)烈*sciencell有血清凍存液（Cat. #0133)和無(wú)血清的凍存液（Cat. #0143)，小規(guī)格（50ml/瓶）包裝，減少分裝步驟。解凍后的細(xì)胞可直接接種到含*生長(zhǎng)培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中直接進(jìn)行培養(yǎng)，24小時(shí)后再用新鮮*培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO，減少離心和重懸對(duì)細(xì)胞的損傷，使用起來(lái)更加方便。

良好的操作習(xí)慣，恰到好處的試劑才能保證細(xì)胞良好的狀態(tài)?？蒲新飞?，古朵生物與您同行！