大多MDR細胞膜上出現MDR-1基因及其基因產物P-糖蛋白過度表達。 多藥抗藥基因的表達實驗是通過反轉錄和PCR的方法來檢測這些特定基因的過度表達。

RNA

PBS lu仿 異丙醇 萘酸 異硫氰酸肽 十二烷基肌酸鈉 構櫞酸鈉 乙酸鈉 二疏基乙醇 乙醇 Taq酶

離心機 紫外分光光度計 瓊脂糖凝膠電泳 PCR儀

一、細胞總RNA提取

1.  收集約5x10⁷個細胞，冷PBS洗滌。

2.  加入400 ul RNA提取液（含6 mol/l 的異硫氰酸肽，0.5%十二烷基肌酸鈉，0.025 mol/l 構櫞酸鈉pH7.0，0.25 mol/l 乙酸鈉，pH4.0，0.5%二疏基乙醇，50%萘酸），混勻。

3.  加入400 ul lu仿，混勻，以13 000 r/min 于4℃離心15 min。

4.  取上清液加入等體積的異丙醇，4℃放置30 min。

5.  然后以13 000 r/min 離心15 min，吸上清，將RNA成點用75%的乙醇洗滌1次，溶于100 ul 的無菌雙蒸餾水中。

6.  并用紫外分光光度計檢測RNA純度（A₂₆₀/A₂₈₀應為1.8~2.0）后備用。

二、反轉錄及PCR擴增

1.  引物
 

1. 盡可能在低溫下操作；

2. 適量斟酌Trizon等的用量；

3. 在每一次離心后除盡蛋白質、不溶物提取操作時必須戴手套、口罩等防止DNA酶的影響；

4. 注意Trizon帶有腐蝕性；

5. 重要的就是防止DNase的污染，手套、口罩*，所用的槍頭和EP管等也要RNA提取的，無DNA酶的。