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古朵生物:Folin-酚試劑配制過程

2019
01-21

09:38:02

分享:
201
來源:上海古朵生物科技有限公司
  方法:
 
  試劑
 
  試劑甲:
 
  A液:Na2CO3 10.00g
 
  NaOH 2.00g
 
  酒石酸鉀鈉(或鉀鹽鈉鹽) 0.25g
 
  混合、溶于500ml蒸餾水中。
 
  B液:CuSO4·5H2O 0.5g
 
  H2O 100.00ml
 
  用前將A液50份與B液1份混合即為試劑甲。
 
試劑乙:
 
  于磨口回流瓶加入下列試劑
 
  Na2WO4·2H2O 100.00g
 
  NaMoO4·2H2O 25.00g
 
  H2O 700.00ml
 
  85%H3PO4 50.00ml
 
  濃HCl 100.00ml
 
  按上回流冷凝管以小火回流10h后再加:
 
  硫酸鋰 150.00g
 
  H2O 50.00ml
 
  溴水 數(shù)滴
 
  開口繼續(xù)沸騰15min,驅(qū)除過量的溴,冷卻后溶液呈黃色微帶綠色(如仍呈綠色,須重復(fù)滴加液體溴步驟)。稀釋至1L,過濾,濾液置于棕色瓶保存。使用時用標(biāo)準(zhǔn)NaOH液滴定,以酚酞為指示劑,然后適當(dāng)稀釋(加水約1倍)使終濃度為1mol/L。
 
  另外,如果money沒有問題的話,可以直接買Sigma公司的Folin-酚試劑,有點貴。
 
  標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
 
 ?、?取標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白2.50mg,溶于10ml蒸餾水中,使成250μg/ml。
 
 ?、?按表8-2稀釋。
 
  表8-2 標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋方法
 
  成分 試 管 號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
 
  牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品(ml) 0 0.2 0.2 0.4 0.1 0.6 0.6 0.8 0.8 1.0 1.0
 
  生li鹽水(ml) 1.0 0.8 0.8 0.6 0.6 0.4 0.4 0.2 0.2 0 0
 
  蛋白含量(μg/ml) 0 50 50 100 100 150 150 200 200 250 250
 
  ⑶ 每管加試劑甲5ml,混合后室溫放置10min,再加0.50ml試劑乙(即Folin酚試劑),立即搖勻(否則顯色降低)。
 
 ?、?30min后測OD650nm。
 
 ?、?以O(shè)D為縱坐標(biāo),蛋白含量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
 
  樣品測定
 
 ?、?待測樣品1ml(適當(dāng)稀釋至約含25μg-250μg/ml)。
 
 ?、?加試劑甲、乙。
 
 ?、?比色、測OD650值。
 
 ?、?查標(biāo)準(zhǔn)曲線,求蛋白含量乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的蛋白含量。
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