如今炙手可熱的 PD-1， CAR-T，TCR-T 技術(shù)等都要歸功于這一偉大發(fā)現(xiàn)及其臨床應(yīng)用。如果你的工作也和免疫療法相關(guān)，是不是像小編一樣也有一丟丟自豪，感覺自己參與見證了人類疾病*的一次飛躍呢？
無論名字多么 fancy 的療法，有沒有用還是得看它能否消滅腫瘤細(xì)胞。在體外實驗中，抗體或經(jīng)改造的免疫細(xì)胞(效應(yīng)細(xì)胞)對腫瘤細(xì)胞(靶細(xì)胞)的殺傷是評估療法效價的*的評判標(biāo)準(zhǔn)之一。多年來，科學(xué)家們已開發(fā)出了多種免疫細(xì)胞殺傷的檢測方法，小編總結(jié)如下：
這些方法原理不同，也各有利弊。比如許多實驗室常用的乳酸脫氫酶 (LDH) 釋放法是通過檢測細(xì)胞裂解后釋放到培養(yǎng)基中的 LDH 來反映細(xì)胞的殺傷程度的。然而免疫細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中都含有 LDH，死亡后都會釋放到培養(yǎng)基中，因此酶標(biāo)儀的讀數(shù)無法特異性地區(qū)分出腫瘤細(xì)胞的死亡，結(jié)果容易受到死亡的免疫細(xì)胞的影響。另外，該方法需設(shè)置多組對照，如無釋放組(不加免疫細(xì)胞)和zui大釋放組(加 Triton X-100 *裂解)來確定zui低和zui高的 OD 值讀數(shù)。如果對照組和實驗組的細(xì)胞鋪板密度不均勻，極易造成誤差，甚至出現(xiàn)實驗組殺傷效率為負(fù)數(shù)的奇怪結(jié)果。
再比如 Luciferase 報告基因法，是將 Luciferase 的基因片段連接在與 T 細(xì)胞激活相關(guān)基因 (比如 IL-2 或 NFAT) 的啟動子之后，通過 Luciferase 的表達(dá)來反映 T 細(xì)胞的激活程度。簡言之是在分子水平檢測 T 細(xì)胞的激活。做該實驗需自行改造 T 細(xì)胞或購買改造好的 T 細(xì)胞系，不夠靈活，具有較大的局限性。
列表中的所有方法還有一個共同缺憾，就是看不到細(xì)胞。有圖才有有真相，細(xì)胞殺傷連個細(xì)胞的影子都沒有，光讓咱們相信這些數(shù)字，心里是不是有點虛？實驗失敗了也很難找原因。另外每次實驗只能測一個時間點，想測多個時間點得鋪多塊板，想想就好累！
檢測免疫細(xì)胞殺傷有沒有既靠譜又簡單的方法呢？
誰說沒有呢？科技的發(fā)展日新月異，小編今天就給大家介紹一下做免疫細(xì)胞殺傷的方法：
Calcein AM 染色法
Calcein AM 是一種可以滲透細(xì)胞膜的染料，通常用來檢測真核細(xì)胞的存活率
在活細(xì)胞中，本來不發(fā)熒光的 Calcein AM 被胞內(nèi)酯酶水解后轉(zhuǎn)化為成發(fā)綠色熒光的 Calcein
在細(xì)胞殺傷實驗中，用 Calcein AM 標(biāo)記靶細(xì)胞，發(fā)出綠色熒光；效應(yīng)細(xì)胞不染色以示區(qū)別。當(dāng)靶細(xì)胞裂解后，由于胞內(nèi)的 Calcein 釋放到培養(yǎng)基中，細(xì)胞失去熒光。通過計算綠色熒光細(xì)胞的數(shù)量即可得到活靶細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞殺傷效率。
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