產(chǎn)品名稱：小鼠角化細胞分泌因子ELISA試劑盒

貨號：QY-M30018

英文名稱:Mouse keratinocyte autocrine factor,KAF ELISA kit

類別：酶聯(lián)免疫分析檢測試劑盒

規(guī)格：96T/48T

包裝：盒

檢測原理：采用雙抗夾心法

保質(zhì)期：六個月

產(chǎn)品保存條件：2-8°C

應(yīng)用范圍：僅供科研研究實驗使用

樣品形式：血清/血漿/組織勻漿/細胞培養(yǎng)上清/其它生物液體（具體情況請咨詢）

標本的采集及保存

1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存  過程 中  如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

2.血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

3.尿液：用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/ 分）。仔細收集上清。  檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以 使細胞破壞并 放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

標本要求： 

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

試劑盒組成：

48孔配制：

1. 說明書: 1份

2. 封板膜:  2片（48）

3. 密封袋:  1個

4  酶標包被板: 1×48 (2-8℃保存)

5. 標準品:    0.5ml×1瓶(2-8℃保存)

6. 標準品稀釋液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)

7. 酶標試劑:     3 ml×1瓶(2-8℃保存)

8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)

9. 顯色劑A液： 3 ml×1瓶(2-8℃保存)

10 .顯色劑B液：  3 ml×1瓶(2-8℃保存)

11 .終止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

12. 濃縮洗滌液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存)

96孔配置：

1.  說明書:1份

2.  封板膜:2片（96）

3.  密封袋: 1個

4.  酶標包被板:1×96 (2-8℃保存)

5.  標準品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)

6.  標準品稀釋液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)

7.  酶標試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)

8.  樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)

9.  顯色劑A液：3 ml×1瓶(2-8℃保存)

10. 顯色劑B液：3 ml×1瓶(2-8℃保存)

11. 終止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

12. 濃縮洗滌液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存)

需要自備的試劑和器材

1.37℃恒溫箱。

2.標準規(guī)格酶標儀。

3.精密移液器及一次性吸頭

4.蒸餾水，

5.一次性試管

6.吸水紙

操作步驟

1、標準品的稀釋：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為9mmol/L，6 mmol/L，3 mmol/L，1.5mmol/L， 0.75 mmol/L）。

2、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4、配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7、溫育：操作同3。

8、洗滌：操作同5。

9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 

10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11、測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

注意事項：

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，*使用排槍加樣。

請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

底物請避光保存。

嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

本試劑不同批號組分不得混用。

如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

計算：

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，    

在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD      

值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋      

倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標      

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值      

代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋      

倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。  

檢測范圍、 OD值：

具體請咨詢在線客服，或者來電索要詳細說明書！

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