過氧化氫酶（Catalase，CAT）試劑盒說明書 
                                                                      分光光度法  50 管/48 樣 
測定意義：                            
CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是zui主要的 H2O2清除酶，
在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。 
測定原理： 
H2O2在 240nm下有特征吸收峰，CAT 能夠分解 H2O2，使反應(yīng)溶液 240nm下的吸光度隨反
應(yīng)時間而下降，根據(jù)吸光度的變化率可計算出 CAT活性。 
需自備的儀器和用品： 
紫外分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水 
試劑組成和配制： 
提取液：60mL×1瓶，4℃保存； 
試劑一：60mL×1瓶，4℃保存； 
試劑二：100 uL×3瓶，4℃保存。 
粗酶液提?。?nbsp;
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備： 
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
（104
個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL提
取液） ，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲 3s，間隔10s，重復(fù)30 次）；
8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 
組織：按照組織質(zhì)量（g） ：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g組織，
加入 1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。 
2、血清（漿）樣品：直接檢測。 
測定步驟： 
1、分光光度計預(yù)熱 30min以上，調(diào)節(jié)波長至 240nm處，蒸餾水調(diào)零。 
2、CAT檢測工作液的配制：用時在每瓶試劑二（100 uL）中加入 20mL試劑一，充分混勻，
作為工作液；用不完的試劑 4℃保存一周； 
3、測定前將 CAT檢測工作液 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴10min。 
4、取 1mLCAT檢測工作液于 1mL石英比色皿中，再加入35μL樣本，混勻；室溫下立即測
定 240nm下的初始吸光值 A1和 1min后的吸光值 A2，計算 ΔA=A1-A2 
CAT 活性計算： 
1、血清（漿）CAT活力的計算: 
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 
CAT(U/mL)= [ΔA×V反總÷（ε×d）×109
]÷V樣÷T=678×ΔA 
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中CAT活力計算： 
（1）按樣本蛋白濃度計算： 
單位的定義：每 mg組織蛋白每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 
CAT(U/mg prot)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109
]÷(V樣×Cpr) ÷T=678×ΔA÷Cpr 
（2）按樣本鮮重計算： 
單位的定義：每 g組織每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 
CAT(U/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109
]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=678×ΔA÷W 
（3）  按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：                                                          
單位的定義：每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 
CAT(U/104 
cell)＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109
]÷（500×V樣÷V樣總）÷T =1.356×ΔA 
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.035×10-3
 L；ε：H2O2摩爾消光系數(shù)，4.36×104
 L / mol /cm；d：
比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.035 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：
反應(yīng)時間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細(xì)胞或細(xì)菌總
數(shù)，500 萬。