如何拯救被污染的細胞

夏天到了，細胞更容易被污染，很多養(yǎng)細胞的朋友在這方面困惑頗多，今天針對貼壁生長的細胞談?wù)劇?在討論之前，大家首先要有一個概念，即潔凈區(qū)，并不是沒有細菌，而是細菌的數(shù)量非常少，國家標(biāo)準(zhǔn)100級的潔凈標(biāo)準(zhǔn)是浮游菌數(shù)不得超過5個每立方米，沉降菌數(shù)不得超過1個每培養(yǎng)皿，而國外的標(biāo)準(zhǔn)比我國的還要高一點，要求的數(shù)量更少。 所以在我們的潔凈操作臺里，并不是真正一個細菌都沒有的，所以在操作的時候還是要盡量利索迅速地完成操作。盡量減少進入培養(yǎng)體系細菌的數(shù)量。 所以處理細菌污染的重要原則就是：無限地稀釋細菌的濃度，無限地減少細菌的數(shù)量！

污染處理流程

1、將污染的培養(yǎng)液倒掉，轉(zhuǎn)燒瓶口，加入10 mlPBS，適當(dāng)晃動清洗培養(yǎng)瓶，然后倒掉。轉(zhuǎn)燒瓶口。

2、繼續(xù)加入10mlPBS，同樣方法晃動，清洗培養(yǎng)瓶，然后倒掉。

3、繼續(xù)加入5mlPBS，同樣方法洗瓶，主要是培養(yǎng)面，然后倒掉。

4、重復(fù)步驟3再洗。

5、重復(fù)步驟3再洗。

6、加入3-5ml雙抗，洗瓶，靜置3-5分鐘，然后吸出。

7、加入3ml雙抗，洗瓶，靜置3-5分鐘，然后吸出。

8、再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。

9、加入10ml培養(yǎng)液，加入2ml雙抗，放置培養(yǎng)箱培養(yǎng)，5小時之后，倒掉培養(yǎng)基，加入PBS洗瓶兩次，然后加入*消化，吹打后置于離心機800-1000r/min離心，然后洗一次。置于新的培養(yǎng)瓶里培養(yǎng)，培養(yǎng)體系加入2ml雙抗。

10、24h之后，視情況換液，若仍然污染嚴重，培養(yǎng)基渾濁，重復(fù)以上步驟，若看不到污染物，則繼續(xù)步驟1)、3）、4）、6）、8），然后加入培養(yǎng)液培養(yǎng)，培養(yǎng)體系加入2ml雙抗。

11、24h之后，若仍污染嚴重，可再重復(fù)一次，若還污染只能棄之（不過一般沒有出現(xiàn)這種情況），若鏡下不見污染物，則換液PBS洗瓶，正常培養(yǎng)。

以上是對于細菌污染（常見為*和大腸桿菌）；若為霉菌或者真菌污染，加入*清洗和培養(yǎng)，終濃度一般為2.5μg/ml（在30μg/ml時會有細胞毒性）。另外也可以選擇在培養(yǎng)基里加3ug/ml的*或*。 其它操作同；若為支原體，用泰樂處理支原體污染效果比較好；若為黑膠蟲污染，我基本上重新培養(yǎng)了，除此還是需要你在無菌觀念和無菌操作上下大功夫加強了，黑膠蟲在科研領(lǐng)域還是很未知的啊。所以沒有什么好的應(yīng)對方法。預(yù)防為主，還是要強調(diào)無菌操作，尤其注意血清的質(zhì)量，這個是主要來源。一般建議用北美血清，這個黑膠蟲污染會概率小。

在操作的過程中，一定要小心操作動作，輕柔緩慢，切忌大動作魯莽。防止細胞脫落。以上方法操作得當(dāng)，基本上都能救活你的細胞（我還沒有聽到?jīng)]救活的反饋）。當(dāng)然如果你的細胞仍有富余或者凍存的，我還是建議你把污染的扔掉，再復(fù)蘇方便省事。這個拯救細胞還是主要針對你就只剩這一瓶細胞無路可退的時候。