小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作指南

本試劑盒僅供研究使用。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)水平。用純化的小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)，再與HRP標記的葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)濃度。

小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成

130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

2酶標試劑6ml×1瓶8標準品（16ng/ml）0.5ml×1瓶

3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶

4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

8ng/ml5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液

4ng/ml4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液

2ng/ml3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液

1ng/ml2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液

0.5ng/ml1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，*使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月