細胞處于活躍的增值狀態(tài)或者通過人工的各種處理后，細胞進入分裂的動物組織科用于染色體的分析。由于在正常的動物骨髓內(nèi)，細胞是處于不斷分裂的，給其注射一定的*可以讓許多細胞處于分裂的細胞停在細胞分裂中期，然后采用常規(guī)空氣干燥法制備染色體，即可得到大量可分析的染色體標本。

    實驗用品

　　一、 材料

　　小白鼠

　　器材

　　水平離心機、顯微鏡、刻度離心管（10ml）、注射器（1ml）、載玻片、燒杯（400ml）、量筒（100ml）、試管架、鑷子、剪刀、*、吸管。

　　二、 試劑

　　1. 2%檸檬酸鈉溶液：稱取2g檸檬酸鈉（檸檬酸三鈉，Tri-sodium citrate, AR）溶解于100ml蒸餾水中。

　　2. 1%檸檬酸鈉溶液。

　　3. 500μm/ml、100mg/ml秋水仙素溶液。

　　4. Giemsa（姬姆薩）原液（pH6.8）

　　Giemsa染粉 1g

　　甘油（丙三醇，glycerine, AR） 33ml

　　甲醇（methyl alcoholA, AR） 45ml

　　將染粉傾入乳缽，加幾滴甘油，在乳缽內(nèi)研磨直到無顆粒為止，此時再將全部剩余甘油倒入，放入60～65℃保溫箱中保溫2h后，加入甲醇攪拌均勻，保存于棕色瓶中備用。

　　5. 0.067mol/L磷酸鹽緩沖液（pH6.8）

　　Na2HPO4·12H2O11.81g

　　（或Na2HPO4·2H2O 5.92g）

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　?、?小白鼠骨髓細胞染色體的制備方法

　　實驗方法

　　1.動物按4μg/g體重的劑量經(jīng)腹腔注射秋水仙素，3～4h后殺死動物。

　　2.取出動物后肢的脛骨和股骨。剪去兩端。

　　3.將0.6～1ml 2%檸檬酸鈉用1ml注射器接上5#針頭注入骨髓腔，將骨髓細胞先沖入小碟取下注射器針頭，反復(fù)吸打骨髓細胞，使細胞團塊分散，轉(zhuǎn)入10ml離心管。

　　4.視骨髓量之多寡加入0.4%KCl溶液8～10ml，隨即將離心管置37±0.5℃水浴中低滲15～20min

　　5.以1000r/min離心8min

　　6.棄上清液，沿離心管壁緩慢加入新配制的甲醇:冰醋酸（3:1）固定液5ml，加固定液時注意不要沖動細胞團塊。

　　7.加完固定液后，立即用吸管將細胞輕輕吸打均勻，靜置固定20min。如此反復(fù)固定2～3次，每次20min。

　　8.固定的細胞經(jīng)離心后，吸取上層固定液，視管底的細胞多寡加入少量新配制的固定液，將細胞團塊輕輕吸打成懸液。

　　9.在干凈、濕、冷的載玻片上滴2～3滴上層細胞懸液，在酒精燈上文火烘干（在空氣干燥的地方可不用）。

　　10.將玻片標本平放于支架上，細胞面朝上，每片滴加1:100 Giemsa磷酸鹽緩沖液3～4ml，染色10min。

　　11.在自來水管下細流沖洗數(shù)秒，去掉Giemsa磷酸鹽緩沖液，用小塊紗布擦干玻片標本底面和四周，顯微鏡觀察和分析。

　　通過以上步驟就制備出可以進行觀察的小鼠骨髓細胞染色體標本，用相應(yīng)的顯微鏡及可進行觀察實驗。