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抗體沒做預(yù)試,用什么樣的稀釋度比較好呢?

2016
11-18

13:19:59

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166
來源:上??道噬锟萍加邢薰?/div>

抗體沒做預(yù)試,用什么樣的稀釋度比較好呢?

不同抗體,即使是同一公司的抗體,其的抗體稀釋度也是不一樣的,需要你實驗摸索。我覺得轉(zhuǎn)膜過夜好像沒有必要吧,轉(zhuǎn)膜的目的也就是將蛋白轉(zhuǎn)到膜上就行 啦,何必浪費時間呢。至于具體的轉(zhuǎn)膜時間,還要看你的目的蛋白分子量的大?。晦D(zhuǎn)膜的設(shè)備,是半干式,還是濕式。一抗當(dāng)然可以過夜,如果你想所短 Western Blot時間的話,可以增高一抗的孵育溫度,我們實驗室一般37度,兩小時就足夠了;你可以參照抗體說明書。至于一抗和二抗得稀釋度,你可以一抗 1:1500;二抗1:20000試試。另外建議你洗膜時,多洗幾次,是在封閉;一抗和二抗后至少是5x5min,跑一張好膜不容易,多盡點心吧,這 樣不會浪費你的時間,只會節(jié)省你的時間!

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