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實(shí)驗(yàn)方法原理    標(biāo)記抗體法雖然具有許多優(yōu)點(diǎn)，但也存在一些難以克服的問(wèn)題，如標(biāo)記抗體的分子增大，對(duì)細(xì)胞膜和組織的穿透力減弱；化學(xué)交聯(lián)反應(yīng)對(duì)抗體和酶的活性有所影響；結(jié)合物中未標(biāo)記的抗體可與抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，影響檢測(cè)方法的敏感性等。不標(biāo)記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過(guò)一系統(tǒng)的非標(biāo)記抗體的免疫學(xué)反應(yīng)，對(duì)組織中的抗原進(jìn)行定位檢測(cè)。不標(biāo)記抗體法又可分為用標(biāo)記物顯示和不同標(biāo)記物顯示兩種方法。前者利用基因工程方法制備雙特異性抗體的F(ab′)2，一個(gè)Fab片段與標(biāo)本中的抗原結(jié)合，一個(gè)Fab是抗體蛋白的結(jié)合片段。在抗體與標(biāo)本作用后，再加入鐵蛋白與抗體結(jié)合，從而顯示組織內(nèi)抗原的所在部位。后者則用磷酸鎢負(fù)染后，直接電鏡觀察。
實(shí)驗(yàn)材料    病毒材料
試劑、試劑盒    抗體磷鎢酸瓊脂糖
儀器、耗材    高速離心機(jī)銅網(wǎng)Fomnvar膜透射電子顯微鏡離心管
實(shí)驗(yàn)步驟    
一、材料及試劑
 
1.  待檢病毒材料  如糞便，氣管分泌物、腦脊髓液、組織培養(yǎng)液等。
 
2.  高速離心機(jī)
 
3.  已知抗體
 
4.  磷鎢酸
 
5.  瓊脂糖
 
6.  其它
 
二、操作方法
 
1.   將被檢病毒材料0.9 ml，加1︰5～1︰10稀釋的特異性免疫血清0.1 ml充分混合。
 
2.   置37℃作用1 h或37℃1 h后再置4℃。
 
3.   以17 000 r/min～23 000 r/min離心90 min。
 
4.   吸去上清，將離心管口倒置于濾紙上，吸去殘留液體。
 
5.   沉淀物中加少量H2O混懸，用3%磷鎢酸(pH6.0)負(fù)染20 s～30 s，滴加于400目銅網(wǎng)Fomnvar膜上，用濾紙從銅網(wǎng)邊緣輕輕吸去多余的負(fù)染液。
 
6.  在透射電鏡下4×104倍觀察。
 
三、結(jié)果判定
 
直接觀察病毒粒子的形態(tài)。由于離心濃縮的處理和特異性抗體的加入，大大提高了觀察的敏感性。