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細(xì)胞培養(yǎng)所有過程及常見問題

細(xì)胞培養(yǎng)是科研入門基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，必須掌握。對于已經(jīng)掌握了的人來說，細(xì)胞培養(yǎng)很簡單；然而對于還沒有入門的人來說，不知所言。對于實(shí)驗(yàn)小白來說首先要了解細(xì)胞來源，哪里購買細(xì)胞株，細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)設(shè)備，細(xì)胞培養(yǎng)試劑的使用與選擇等；而對于老司機(jī)來說，需要知道如何鑒定細(xì)胞污染以及如何處理細(xì)胞濡染，如何選擇合適的血清和培養(yǎng)基，消化細(xì)胞*的選擇以及用量等等常見問題。

先談?wù)勛约杭?xì)胞培養(yǎng)過程的一些經(jīng)驗(yàn)。

1.細(xì)胞株的購買：細(xì)胞株到正規(guī)的公司購買，如ATCC，中科院細(xì)胞庫（北京，上海，武漢等地都要細(xì)胞庫）。zui主要的是現(xiàn)在很多雜志發(fā)表文章，要求提供細(xì)胞鑒定書，所以購買細(xì)胞的時(shí)候一定要問清楚是否會提供細(xì)胞鑒定書。

2.培養(yǎng)基及血清選擇：選擇進(jìn)口的，尤其是比較難養(yǎng)的細(xì)胞，更需要進(jìn)口試劑培養(yǎng)。國產(chǎn)試劑對于有些細(xì)胞也可以使用，但是大部分國產(chǎn)試劑純度沒有進(jìn)口的好。血清強(qiáng)烈建議使用進(jìn)口血清，血清是細(xì)胞營養(yǎng)的重要部分，很多細(xì)胞養(yǎng)不活就是血清不好。不要貪便宜買不正規(guī)的血清，一分錢一分貨。我們搞科研要得到可靠的結(jié)果，首先就要保證培養(yǎng)過程沒有問題，不要因?yàn)榻?jīng)費(fèi)緊張去省錢買不好的血清，因?yàn)檠宀缓脤?dǎo)致實(shí)驗(yàn)做不好實(shí)在是沒有必要，浪費(fèi)時(shí)間又沒做出結(jié)果。

3.細(xì)胞消化：加入*消化細(xì)胞覆蓋細(xì)胞即可，沒必要加過多*，浪費(fèi)資源。25cm^2培養(yǎng)瓶中加500ul足夠了，甚至更少。很多新手擔(dān)心消化不下來，加入大量*，實(shí)在是沒有必要。

4.消化后離心：消化后是否需要離心？對于剛剛復(fù)蘇的細(xì)胞，復(fù)蘇過程需要離心去除細(xì)胞凍存保護(hù)劑DMSO等，DMSO在低溫可保護(hù)細(xì)胞，但是在常溫確有毒性，會損傷細(xì)胞生長。復(fù)蘇的細(xì)胞傳*、二代時(shí)需要離心，把*和壞死細(xì)胞去掉。等細(xì)胞傳代穩(wěn)定后，通過優(yōu)勝劣汰，存活下來的細(xì)胞都是質(zhì)量比較高了，那么在以后傳代過程可以不用每次都離心，加入*消化后，觀察到細(xì)胞開始從培養(yǎng)瓶壁脫落下來，就把*吸出來，加入*培養(yǎng)基終止消化，這個(gè)被終止消化的細(xì)胞懸液可以直接用于傳代，不要離心。因?yàn)殡x心也是一把雙劍，離心在去除*的同時(shí)，也會損傷細(xì)胞。當(dāng)然間隔幾次傳代后，終止消化的細(xì)胞懸液定期離心，因?yàn)橐恢辈浑x心也不太好。總之掌握一個(gè)度吧。

5.細(xì)胞凍存：對于腫瘤細(xì)胞，因?yàn)槠渖L能力比較強(qiáng)，可以采用加入1ml凍存液，按照 7：2：1或者5：4：1配置凍存液。即7份*培養(yǎng)基：2份血清：1份DMSO或者即5份*培養(yǎng)基：4份血清：1份DMSO。對于其他細(xì)胞株按照以上比例凍存也可以，按照9：1配置，即9份血清：1份DMSO。一小瓶可以凍存一管細(xì)胞。

6.污染的細(xì)胞處理：建議扔掉，包括近期用于細(xì)胞培養(yǎng)配置的所以培養(yǎng)基。污染的細(xì)胞要拯救過來，挺麻煩的，何況污染后細(xì)胞性質(zhì)可能就變了。至于如何拯救污染的細(xì)胞，